Mikroskopická analýza sputa

Mikroskopické pozorování nativních i pevných vzorků barvených sputa umožňuje podrobné zkoumání jeho buněčné struktury, a určité míry odráží povahu patologického procesu v plicích a průdušek, jeho činnosti, aby se určily různé vláknité a krystalické formace, mají také významnou diagnostickou hodnotu, a nakonec zhruba posoudit stav mikrobiální flóra dýchacího traktu (bakterioskopie).

Při mikroskopii použijte nativní a malované přípravky sputa. Pro studium mikrobiální flóry (test), sputum šmouhy se obvykle barveny Romanovský-Giemsa, Gram, a pro detekci Mycobacterium tuberculosis, ale Ziehl-Nielsen.

Buněčné prvky a elastická vlákna

Z buněčných prvků, které lze detekovat ve sputu pacientů s pneumonií, mají epiteliální buňky, alveolární makrofágy, leukocyty a erytrocyty diagnostický význam.

Epitelové buňky. Dlaždicového epitelu nemá z úst, nosohltanu, hlasivek a diagnostickou hodnotu epiglottis, a to i přesto, že detekce velkého počtu dlaždicových buněk, obvykle označuje vzorek nízkou kvalitu slin do laboratoře a slin, obsahující podstatné nečistoty.

U pacientů s pneumonií je sputa považována za vhodnou k vyšetření, pokud při mikroskopii s malým nárůstem počet epiteliálních buněk nepřekračuje 10 v zorném poli. Větší počet epiteliálních buněk naznačuje nepřijatelnou převahu orofaryngeálního obsahu v biologickém vzorku.

Alveolární makrofágy, které se v malých množstvích mohou být také ve kterékoli sputu jsou větší klec retikulogistiotsitarnogo původ excentricky umístěné v blízkosti hojné inkluze a jádro v cytoplazmě. Tyto vměstky mohou sestávat z drobných prachových částic pohlcovaných makrofágy (prachové buňky), leukocytů a podobně. Počet alveolárních makrofágů se zvyšuje se zánětlivými procesy v plicním parenchymu a dýchacích cestách, včetně pneumonie.

Buňky z cylindrického ciliovaného epitelu sliznice sliznice hrtanu, průdušnice a průdušek. Vypadají jako podlouhlé buňky, rozšířené na jednom konci, kde se nachází jádro a řasa. Články Válcové řasinkami epitelu ve kterékoli sputu, ale jejich zvýšení indikuje poškození bronchiální sliznice a průdušnice (akutní a chronická bronchitida, bronchiektázie, průdušnice, laryngitida).

Leukocyty v malém množství (2-5 v zorném poli) se nacházejí v jakémkoli sputu. Při zánětu plicní tkáně nebo bronchiální sliznice a průdušnice, zejména při nadýchání (gangréna, absces plic, bronchiektázie), je jejich počet významně zvýšen.

Při barvení přípravků sputa podle Romanovského-Giemsy je možné rozlišit jednotlivé leukocyty, které někdy mají důležitou diagnostickou hodnotu. Tedy, když je exprimována plicní zánět nebo zvýšení bronchiální sliznice tkáně jako celkový počet neutrofilů a počtu degenerativních forem fragmentaci jádra a zničení cytoplasmy.

Zvýšení počtu degenerativních forem leukocytů je nejdůležitějším znakem aktivity zánětlivého procesu a závažnějšího průběhu onemocnění.

Erytrocyty. Samostatné erytrocyty lze detekovat prakticky a jakýkoli sputum. Výrazný nárůst je zaznamenán při narušení vaskulární permeability u pacientů s pneumonií, s destrukcí plicní nebo bronchiální tkáně, stagnací v malém kruhu cirkulace, infarktem plic atd. Ve velkém počtu červených krvinek ve sputu se objevuje během hemoptýzy jakékoliv geneze.

Elastické vlákna. Dalším prvkem sputových plastových vláken, které se objevují ve sputu, jsou destrukce plicní tkáně (absces plic, tuberkulóza, rozpadavá rakovina plic atd.). Elastická vlákna jsou prezentována ve sputu ve formě tenkých dvouvrstvých, zvlněných vláken s dichotomickým dělením na koncích. Vzhled elastických vláken ve sputu u pacientů se závažnou pneumonií naznačuje výskyt jedné z komplikací onemocnění - abscesu plicní tkáně. V některých případech při tvorbě plicního abscesu mohou být elastická vlákna ve sputu detekována dokonce mírně dříve než odpovídající radiografické změny.

Často, s krupavou pneumonií, tuberkulózou, aktinomykózou, fibrinózní bronchitidou v sputu, mohou být detekována tenká fibrinová vlákna.

Známky aktivního zánětlivého procesu v plicích jsou:

1. povaha sputa (mukopurulentní nebo purulentní);
2. zvýšení počtu neutrofilů ve sputu, včetně degenerativních forem;
3. zvýšení počtu alveolárních makrofágů (z jednotlivých klastrů několika buněk v zorném poli a více);

Vzhled elastických vláken ve sputu naznačuje zničení plicní tkáně a tvorbu plicního abscesu.

Konečné závěry o přítomnosti a stupni aktivity zánětu a destrukce plicní tkáně se tvoří pouze tehdy, když se porovnávají s klinickým obrazem onemocnění a výsledky dalších laboratorních a instrumentálních metod vyšetřování.

[1], [2], [3], [4], [5]

Mikrobiální flóra

Smrtelná mikroskopie, barvená podle Gramu, a studie mikrobiální flóry (bakterioskopie) u části pacientů s pneumonií umožňuje předběžně stanovit nejpravděpodobnější původce plicní infekce. Tato jednoduchá metoda expresní diagnostiky patogenu není dostatečně přesná a měla by být použita pouze v kombinaci s dalšími (mikrobiologickými, imunologickými) metodami vyšetření sputa. Imerzní mikroskopie zbarvených skvrn je někdy velmi užitečná pro nouzový výběr a podávání odpovídající antibiotické terapie. Nicméně je třeba mít na paměti možnost kontaminace bronchiálního obsahu mikroflóry horních cest dýchacích a ústní dutiny, zejména pokud je nesprávné sběr sputa.

Proto je sputa považována za vhodnou pro další vyšetření (bakterioskopie a mikrobiologické vyšetření), pouze pokud splňuje následující podmínky:

• Gramové zbarvení ve sputu odhaluje velké množství neutrofilů (více než 25 v zorném poli s malým zvětšením mikroskopu);
• Počet epiteliálních buněk, charakteristických pro obsah orofaryngu, nepřesahuje 10;
• v přípravku převládá mikroorganismy stejného morfologického typu.

Při barvení podle Grama sputa v nátěru někdy dost určit gram pneumokoky, streptokoky, stafylokoky a gram-negativní bakterie skupinu dobrá -. Klebsiellu hůlkou Pfeiffer, E. Coli a jiných gram-pozitivní bakterie, v tomto případě větší modré a Gram - červená.

Bakteriální patogeny pneumonie

Gram-pozitivní	Gram-negativní
Pneumokokový Streptococcus pneumoniae. Streptokoky streptokoky Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans. Stafilokoky: Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus.	Klebsiella  (Klebsiella pneumoniae) Hemophilus influenzae (Pfeiffer) Haemophilus influenzae Pseudomonas aeruginosa  (Pseudomonas aeruginosa) Legionella (Legionella Pneumophilia) E. Coli (Escherichia coli)

Pre sputum stěr je nejjednodušší způsob ověření pneumonie patogenu a má určitou hodnotu pro výběr optimální léčby antibiotiky. Například při zjišťování šmouhy barvené Gram, grompolozhitelnyh diplokoky (pneumokoky) nebo stafylokoky místo širokospektrých antibiotik, které zvyšují riziko selekce a množení mikroorganismů aitibiotikorezistentnyh možné přiřadit cílené terapie, aktivní proti stafylokokům, a pneumokoky. V jiných případech, detekce dominantních flóry v nátěrech Gram může znamenat, pas, že způsobuje pneumonii Enterobacteriaceae jsou gram-negativní (Klebsiella, Escherichia coli, atd.), Což vyžaduje odpovídající cílovou cílenou terapii.

Avšak předběžný závěr pravděpodobného původce plicní infekce mikroskopie může být provedeno PAS pouze na významný nárůst bakterií ve sputu, v koncentraci 10 ⁶ - 10 ⁷  mikrobiálních buněk / ml nebo více (LL Vishnjakova). Nízké koncentrace mikroorganismů (<10 ³  mikrobiálních buněk / ml) jsou charakteristické doprovodné mikroflóry. V případě, že koncentrace mikrobiálních buněk se pohybuje v rozmezí od 10 ⁴  do 10 ⁶  mikrobiálních buněk / ml, to nevylučuje etiologický roli tohoto mikroorganismu v výskytu plicních infekcí, ale to dokázat.

Je třeba také vzít na vědomí, že "atypické" intracelulární patogeny (mykoplazma,  legionella, chlamydia, rickettsia) nepoškozují Gramm. V těchto případech může dojít k podezření, že existuje "atypická" infekce, jestliže rozsypy vykazují disociaci mezi velkým počtem neutrofilů a extrémně malým počtem mikrobiálních buněk.

Bohužel, přičemž způsob se vyznačuje tím, mikroskopie a obecně poměrně nízkou citlivost a specificitu. Není prediktivní hodnota i proti pneumokoků jsou dobře vykreslen stěží dosahuje 50%. To znamená, že polovina udává metoda falešně pozitivní výsledky. Je to způsobeno několika důvodů, jedním z nich je skutečnost, že asi třetina pacientů před hospitalizací byla podávána antibiotika, což značně snižuje účinnost sputa mikroskopicky. Kromě toho, i v případě pozitivních výsledků studie, což ukazuje na dostatečně vysokou koncentraci v nátěru „typické“ bakteriální patogeny (např. Pneumokokové), nelze zcela vyloučit přítomnost ko-infekce „atypické“ intracelulární patogeny (Mycoplasma, Chlamydia, Legionella).

Metoda bakterioskopie skvrn na sputu, barvená Gramem, v některých případech pomáhá ověřit příčinný účinek pneumonie, i když má obecně velmi nízkou prediktivní hodnotu. Atypické intracelulární patogeny (mykoplazma, legionella, chlamydia, rickettsia) nejsou vůbec ověřeny metodou bakterioskopie, jelikož neznechovávají Gramm.

Je třeba zmínit možnost mikroskopické diagnostiky u pacientů s pneumonií infekce plicních plísní. Nejvíce relevantní pro pacienty dlouhodobě léčených širokospektrých antibiotik, je detekce nativní nebo mikroskopií obarví sputa Candida albicans v podobě buněk kvasinek a větvení podhoubí. Ukazují změnu mikroflóry tracheobronchiálního obsahu, který se vyskytuje pod vlivem antibiotické léčby, což vyžaduje podstatnou korekci terapie.

V některých případech u pacientů s pneumonií existuje potřeba diferencovat stávající onemocnění plic s tuberkulózou. Pro tento účel používají barvu smear Ziehl-Nielsen, které v některých případech umožňuje identifikaci Mycobacterium tuberculosis, ale negativní výsledek takovéhoto vyšetřování neznamená nedostatek pacientů s TBC. Při barvení sputa podle Tsil-Nielsen je mycobacterium tuberculosis červená barva a všechny ostatní prvky sputa jsou modré. Tuberkulózní mykobakterie mají vzhled výkalů, rovné nebo mírně zakřivené tyčinky různých délek se samostatným zahušťováním. Jsou umístěny v přípravě ve skupinách nebo jednotlivě. Diagnostickou hodnotou je detekce při přípravě dokonce jedné tuberkulózy mykobakterií.

Pro zvýšení účinnosti mikroskopické detekce tuberkulózy mykobakterií použijte řadu dalších metod. Nejběžnější z nich je tzv flotační způsob, ve kterém se homogenizuje ve sputu třepe se toluen, xylen nebo benzen, který klesá, navařování, zachytit mykobakterie. Po usazování sputu je horní vrstva pipetována na sklíčko. Poté je droga fixována a zafarbena Tsilyu-Nielsenem. Existují další metody akumulace (elektroforéza) a mikroskopie tuberkulózních bakterií (luminiscenční mikroskopie).

Mikroskopické vyšetření (analýza) hlenu umožňuje detekovat hlen, buněčné elementy, vláknité a krystalické formace, houby, bakterie a parazity.

Buňky

• Alveolární makrofágy jsou buňky retikulogistocytového původu. Velké množství makrofágů ve sputu je zjištěno v chronických procesech a ve fázi řešení akutních procesů v bronchopulmonálním systému. Alveolární makrofágy obsahující hemosiderin ("buňky srdečních defektů") jsou detekovány s mírným infarktem, krvácení, stagnací v malém kruhu oběhu. Makrofágy s lipidovými kapkami jsou známkou obstruktivního procesu v průduškách a průduškách.
• Xantomové buňky (mastné makrofágy) se vyskytují v abscesu, aktinomykóze, echinokokóze plic.
• Buňky cylindrického ciliated epitelu jsou buňky sliznice hlenu, průdušnice a průdušek; nacházejí se u bronchitidy, tracheitidy, bronchiálního astmatu, maligních novotvarů plic.
• Plochý epitel je detekován, když do sputu proniká špilka, nemá diagnostický význam.
• Leukocyty v jednom nebo v jiném množství jsou přítomny v jakémkoli sputu. Velké množství neutrofilů je detekováno v mukipurulentním a purulentním sputu. Eosinofily jsou bohaté na sputa v bronchiálním astmatu, eozinofilní pneumonii, glottis plicních lézích a infarktu plic. Eosinofily se mohou objevit v sputu pro tuberkulózu a rakovinu plic. Velké množství lymfocytů se vyskytuje u černých kašelů a zřídka i při tuberkulóze.
• Erytrocyty. Detekce jednotlivých červených krvinek v sputu nemá diagnostický význam. V přítomnosti čerstvé krve ve sputu určena nemodifikované erytrocyty, pokud sputum krve se pohybuje, který se nachází v dýchacích cestách po dlouhou dobu, detekovat vyluhovány erytrocyty.
• Buňky maligních nádorů se nacházejí v maligních novotvarů.

Vlákna

• Elastická vlákna se objevují v rozpadu plicní tkáně, která je doprovázena destrukcí epiteliální vrstvy a uvolněním elastických vláken; nacházejí se v tuberkulóze, abscesu, echinokokóze, novotvarů v plicích.
• Koronální vlákna jsou zjištěna při chronických onemocněních plic, jako je kavernózní tuberkulóza.
• Kalcinovaná elastická vlákna jsou elastická vlákna impregnovaná vápenatými solemi. Zjištění jejich vzniku v sputu je charakteristické pro rozpad tuberkulární petrititidy.

Spirály, krystaly

• Kurshmanské spirály jsou tvořeny v spastickém stavu průdušek a přítomnosti hlenu v nich. Během tahu kašle se do lumen většího bronchu uvolní viskózní hlen, který se ve spirále zkroutí. Kurshmanské spirály se objevují s bronchiálním astmatem, bronchitidou, plicními nádory, stlačujícími průduchy.
• Krystaly Charcot-Leiden jsou produkty rozkladu eosinofilů. Obvykle se objevují v sputu obsahujícím eozinofily; jsou charakteristické pro bronchiální astma, alergické stavy, eozinofilní infiltrace v plicích, plicní močení.
• Krystaly cholesterolu se objevují s abscesem, plicní echinokokózou, novotvary v plicích.
• Krystaly hematoidinu jsou charakteristické pro absces a gangrénu plic.
• V aktinomykóze plic jsou zjištěny kousky aktinomycete.
• Prvky Echinococcus se objevují s echinokokózou plic.
• Corks Dietrich - hrudky žlutošedé barvy s nepříjemným zápachem. Jsou tvořeny detritem, bakteriemi, mastnými kyselinami, kapkami tuku. Ty jsou typické pro absces plic a bronchiektázii.
• Ehrlichův tetrad se skládá ze čtyř prvků: kalcifikovaného detritu, kalcifikovaných elastických vláken, krystalů cholesterolu a mycobacterium tuberculosis. Objevuje se v rozpadu kalcifikovaného primárního tuberkulárního zaostření.

Mycelium a vznikající plísňové buňky se objevují v houbových lézích bronchopulmonálního systému.

Pneumocystis se vyskytuje u pneumocystis pneumonie.

V kokcidioidomykóze plic se detekují sférické houby.

Ascaridové larvy jsou detekovány s ascariázou.

Larvy střevního ugristika jsou identifikovány silylloidiózou.

Vejce plicní chřipky se identifikují s paragonimózou.

Prvky nalezené v sputu v bronchiálním astmatu. Když je bronchiální astma obvykle oddělena malým množstvím sliznice, viskózní sputa. Makroskopicky vidíte Kurshmanovu spirálu. Když je mikroskopický výzkum charakteristický pro přítomnost eosinofilů, válcového epitelu, existují krystaly Charcot-Leiden.