Konfokální intravitální mikroskopie rohovky

Konfokální mikroskopie rohovky je jednou z moderních metod vyšetřování; umožňuje provádět intravitální sledování rohovky pomocí vizualizace tkání na úrovni buněk a mikrostruktur.

Tato metoda díky původnímu návrhu mikroskopu a jeho vysokému rozlišení umožňuje vizualizaci živých rohovkových tkání , měřit tloušťku každé z vrstev a posoudit stupeň morfologických poruch.

Účel konfokální mikroskopie rohovky

Charakterizují morfologické změny v rohovce, které vznikají při různých zánětlivých a dystrofických onemocněních, stejně jako při chirurgických zákrocích a účincích CR.

Morfologické údaje jsou potřebné k posouzení závažnosti patologického procesu, účinnosti léčby a určení taktiky léčby pacienta.

Indikace postupu

• Zánětlivá onemocnění rohovky ( keratitida ).
• Dystrofální onemocnění rohovky ( keratokonus, Fuchsova dystrofie atd.).
• Syndrom "suchého oka".
• Stavy po chirurgických zákrocích na rohovce ( transplantací rohovky, keratorefrakčních operacích).
• Podmínky spojené s nosením kontaktních čoček.

[1], [2], [3], [4]

Příprava

Tato studie je možná bez použití anestetik. Kapka imerzní kapaliny se umístí na čočku konfokální mikroskopické čočky. Tím se eliminuje přímý kontakt čočky s rohovkou a minimalizuje se riziko poškození epitelu.

[5], [6], [7], [8], [9],

Technika konfokální mikroskopie rohovky

Studie se provádí na konfokálním mikroskopu ConfoScan 4 (Nider) s nárůstem 500 krát. Přístroj umožňuje vyšetřit rohovku po celé její tloušťce.

Velikost vyšetřované zóny je 440 × 330 μm, tloušťka skenovací vrstvy je 5 μm. Objekt s kapkou gelu je přiveden do rohovky, aby se dotkl a nastavil tak, aby tloušťka ponorné kapaliny byla 2 mm. Konstrukce zařízení umožňuje zkoumat rohovku v centrální zóně a jejích parciálních oblastech.

Kontraindikace k postupu

Relativní kontraindikace označila podráždění oka na pozadí akutního zánětlivého procesu.

[10], [11]

Normální výkon

Normální morfologický obraz rohovky

Přední epitel je tvořen 5-6 vrstvami buněk. Průměrná tloušťka celého epitelu je přibližně 50 μm. Podle morfologického uspořádání se rozlišují následující vrstvy (zevnitř směrem ven): bazální, subkutánní a povrchní.

• Nejvnitřnější (bazální) vrstva je reprezentována malými hustými válcovitými buňkami bez viditelného jádra. Brány bazálních buněk jsou jasné a jasné.
• Střední vrstva se skládá z 2-3 vrstev páteřních (okřídlených) buněk s hlubokými invaginacemi, do nichž jsou vystaveny výrůstky sousedních buněk. Mikroskopicky jsou hranice buněk poměrně dobře rozpoznatelné a jádra nemusí být definována nebo fuzzy.
• Povrchová vrstva epitelu je reprezentována jednou nebo dvěma vrstvami polygonálních buněk s jasnými hranicemi a homogenní hustotou. Jádra jsou obvykle jasnější než cytoplasma, v níž lze také rozlišovat tmavý kruh s téměř jádrem.

Mezi buňkami povrchové vrstvy se rozlišuje mezi temnotou a světlem. Zvýšená odrazivost epiteliálních buněk naznačuje pokles hladiny metabolismu v nich a začátek jejich deskvamace.

Bowmanova membrána je průhledná struktura, která neodráží světlo, takže je nemožné ji vizualizovat při konfokální mikroskopii.

Subbasický nervový plexus je umístěn pod membránou Bowman. Obvykle nervová vlákna vypadají jako jasné proužky běžící paralelně na tmavém pozadí a navzájem se dotýkají. Reflexivita (odrazivost) může být v délce vlákna nerovnoměrná.

Strom rohovky zaujímá 80 až 90% tloušťky rohovky a skládá se z buněčné a extracelulární složky. Základními buněčnými prvky stromy jsou keratocyty; tvoří přibližně 5% objemu.

Typický mikroskopický vzorek stromy zahrnuje několik jasných nepravidelných oválných tvarů (keratocytové jádro), které leží v tloušťce průhledné tmavě šedé nebo černé matrice. Obvykle není vizualizace extracelulárních struktur možná z důvodu jejich průhlednosti. Strom může být podmíněně rozdělen na podvrstvy: přední (umístěné přímo pod membránou Bowman a tvoří 10% tloušťky stromy), přední, střední a zadní.

Průměrná hustota keratocytů je vyšší v přední stromě, postupně se jejich počet snižuje směrem k zadním vrstvám. Přední hustota buňka stromatu je téměř dvakrát vyšší než zadní stromálních buněk (v případě, že hustota buněk předního stromatu je bráno jako 100%, pak je hustota zadní asi 53,7% buněk). V přední stromě mají jádra keratocytů kulatý tvar kukuřičného tvaru av zadní oválné a prodloužené.

Jádra keratocytů se mohou lišit v jasnosti. Různá schopnost odrážející světlo závisí na jejich metabolickém stavu. Jasnější buňky jsou považovány za aktivované keratocyty ("stresové buňky"), jejichž aktivity jsou zaměřeny na udržování vnitřní rohovkové homeostázy. V normě a zorném poli existují jediné aktivované buňky.

Nervová vlákna v předním stromu rohovky jsou vizualizována jako jasně homogenní pásy, které často tvoří bifurkaci.

Descemetová membrána je normálně průhledná a není vizualizována konfokální mikroskopií.

Zadní epitel je monovrstvou hexagonálních nebo polygonálních plochých buněk s rovnoměrně lehkým povrchem na pozadí odlišných tmavých intercelulárních hranic.

Zařízení poskytuje možnost manuálního nebo automatického výpočtu hustoty buněk, jejich oblasti a koeficientu variability.

Patologické změny struktury rohovky

Keratokonus je charakterizován významnými změnami v předním epitelu a stromě rohovky.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]