Virus hepatitidy A.

Virové hepatitida A je infekční onemocnění člověka charakterizované převažujícím poškozením jater a projevující se klinickou intoxikací a žloutenkou. Virem hepatitidy A byl detekován v roce 1973 S. Feinstonesem (a dalšími) za použití metody imunitní elektronové mikroskopie a infekce opic - šimpanzů a kosmanů. Způsob imunitní elektronové mikroskopie je to, že stolice k filtrátu se přidá hepatitidy Pacient specifická protilátka (zotavující se sérum) a sraženina se podrobí elektronové mikroskopie. V důsledku interakce virů se specifickými protilátkami procházejí specifickou agregací. V tomto případě jsou snadněji detekovány a agregace pod vlivem protilátek potvrzuje specificitu patogenu. Objev S. Feinstone byl potvrzen v experimentech na dobrovolnících.

Virus hepatitidy A má sférický tvar, průměr virionu je 27 nm. Genom je reprezentován jednovláknovou pozitivní RNA s hmotností 2,6 MD. Supercapsid chybí. Typ symetrie je kubický - ikosahedron. Kapsid má 32 kapsomerů, je tvořen čtyřmi polypeptidy (VP1-VP4). Svými vlastnostmi patří virus hepatitidy A k rodu Heparnovirus, rod Picornaviridae. Antigenicky je virus hepatitidy A (HAV - virus hepatitidy A) homogenní. HAV se dobře rozmnožuje v těle šimpanzů, paviánů, hamadrilů a opic v oblasti hazardních her (marmosety). Po dlouhou dobu se virus nemohl kultivovat. Pouze v 80. Letech. Bylo možné získat buněčné kultury, ve kterých se šíří HAV. Původně používané pro tyto účely, imortalizované embryonální linie ledvinových buněk Macaca mullata (kultura FRhk-4), a se - transplantované ledviny buněčná linie zelené opice (Kultura 4647).

Podle doporučení odborníků WHO byla přijata následující nomenklatura markerů viru hepatitidy A: protilátky proti viru hepatitidy A-NAU proti viru hepatitidy A: anti-NAV IgM a anti-NAV IgG.

HAV jsou malé částice o průměru 27-30 nm, s ikosahedrální symetrií a homogenitou. Na elektronovém difraktogramu získaném způsobem imunitní agregace jsou detekovány elektronové husté částice s povrchově umístěnými symetricky uspořádanými kapsomery. Při negativním kontrastu jsou v přípravcích zjištěny jak úplné, tak prázdné částice. Nukleokapsid NAV, na rozdíl od chřipky, nemá povrchové výčnělky a membrány. Je také důležité, aby virion HAV neměl srdcově tvarovanou strukturu.

Podle jeho fyzikálně-chemických vlastností viru hepatitidy A se vztahuje k rodině Picornaviridae, rod enterovirus s atomovým číslem 72. To však taxonomie byla příliš neobvyklé a WHO zjistil, že je možné nechat terminologii „viru hepatitidy A“.

Stejně jako všechny viry rodiny Picornaviridae, virus hepatitidy A obsahuje ribonukleovou kyselinu. Některé laboratoře prokázaly možnost klonování genomu viru hepatitidy A, což otevírá možnost získat očkovací přípravky.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Odolnost viru hepatitidy typu A

Virus je relativně odolný vůči vysokým teplotám, kyselinám, rozpouštědlům tuků (nejsou tu žádné tuky), dezinfekčním prostředkům, toleruje nízkou teplotu. To vše přispívá k jeho dlouhodobému zachování ve vnějším prostředí. Při pokojové teplotě přežívá několik týdnů, při 60 ° C částečně ztrácí infekčnost po 4-12 hodinách, zcela - po několika minutách při 85 ° C Vysoce odolný vůči chlóru, díky kterému je schopen proniknout do vodovodu přes bariéry čistíren odpadních vod.

Shrneme-li všechny údaje, můžeme virus viru hepatitidy A charakterizovat následovně:

• přírodním pánem je člověk;
• experimentální zvířata - marmozet, šimpanz;
• zdroj infekce - výkaly;
• epidemie a endemie;
• přenosová cesta je fekálně-orální;
• inkubační doba - 14-40 dnů;
• přechod na chronickou hepatitidu - není poznamenáno.

Imunologické vlastnosti NAV jsou následující:

• Prototypové kmeny - Ms-1, CR-326, GVG. Všechny jsou imunologicky podobné nebo identické;
• Protilátky - IgM a IgG jsou produkovány v reakci na zavedení strukturálních proteinů viru a jsou ochranné;
• I Trofický účinek lidského sérového y-globulinu - chrání nebo zmírňuje onemocnění pod podmínkou podání před infekcí nebo během inkubační doby.

Fyzikálně-chemické vlastnosti NU jsou následující:

• Morfologie je sférická částečka bez krytu s kubickou symetrií, kapsida sestává z 32 kapsomerů;
• Průměr je 27-30 nm;
• Hustota v CsCl (g / cm3) je 1,38-1,46 (otevřené částice), 1,33-1,34 (zralý virion), 1,29-1,31 (nezralé viriony, prázdné částice);
• Koeficient sedimentace je 156-160 zralých virionů;
• Nukleová kyselina - jednovláknová lineární RNA;
• Relativní molekulová hmotnost - 2,25 106-2,8 106KD;
• Počet nukleotidů je 6 500 - 8 100.

Stabilita NAV ve fyzikálně-chemických účincích je následující:

• Chloroform, ether - je stabilní;
• Chlor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - částečná inaktivace;
• Chloramin, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - úplná inaktivace;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 hodin - úplná inaktivace, 1: 350, 20 ° C, 60 min - částečná inaktivace.

Teplota:

• 20-70 ° C - stabilní;
• 56 ° C, 30 minut - je stabilní;
• 60 ° С, 12 hodin - částečná inaktivace;
• 85 ° С, 1 min - plná inaktivace;
• Autoklávování, 120 ° C. 20 minut - úplná inaktivace;
• Suché teplo, 180 ° C, 1h - úplná inaktivace;
• UV, 1,1 W, 1 min - kompletní inaktivace.

Předložená data ukazují, že fyzikálně-chemické vlastnosti viru hepatitidy A jsou nejblíže enterovirusu. Stejně jako ostatní enteroviry, HAV je rezistentní na mnoho dezinfekčních roztoků, zcela inaktivován několik minut při 85 ° C a autoklávován.

Je prokázáno, že virus hepatitidy A může reprodukovat v primárních a kontinuálních jednovrstvé kultury lidských buněčných linií, a opice. Působí zejména rozmnožování viru hepatitidy A v in vitro kulturách je pozorována při použití jako výchozí materiál extrahuje pacientů jater opice. Mělo by však být poznamenáno, že ve všech experimentech podle reprodukci viru hepatitidy A v kulturách in vitro za zmínku dlouhá inkubační doba v primárních pasážích (-10 až 4 týdny), následně akumulaci virové genetické zvyšuje materiálu, ale absolutní hodnoty jsou velmi menší, která dává vzniknout mnoha výzkumníků mluvit neúplného replikace viru hepatitidy A v tkáňových kulturách.

Shrnutí údajů z literatury o rozmnožování viru hepatitidy typu A v klínovitých kulturách lze konstatovat, že skutečnost o prodloužené zkušenosti s HAV in vitro je nepochybná. Optimální podmínky pro stabilní vysokou úroveň virové replikace nebyly konečně identifikovány a to omezuje studium jeho biologických vlastností, produkci zdroje činidel pro výrobu diagnostiky a návrh vakcín.

Současně jsou v literatuře nalezeny optimističtější názory na tento problém. Řešení všech otázek souvisejících s kultivací viru hepatitidy A je záležitostí v blízké budoucnosti. Při studiu Optimální podmínky HAV šíření v buněčné kultuře embryonálních ledvin opic rhesus odhalila dvě fáze: fáze infekční virové produkce (až 6-8 dnů v 5. Pasáži) a fáze intenzivního akumulaci virového antigenu. Ukazuje se také, že nejzávažnější akumulace virového antigenu nastává v podmínkách tzv. Válcování (rotující lahve). Tímto způsobem se otevírají široké možnosti získání kulturního antigenu ve velkém množství a následně se objeví výchozí materiál pro přípravu diagnostických systémů a výrobu očkovacích přípravků.

Epidemiologie hepatitidy A

Viry hepatitidy A mají vysokou patogenitu u lidí. Podle závěru WHO (1987) je na počátku onemocnění stačit nakazit pouze jeden virion. Praktická infekční dávka je však pravděpodobně mnohem vyšší. Zdrojem infekce je pouze infikovaná osoba. Virus se uvolňuje ve velkém množství s výkaly 12-14 dní před výskytem žloutenky a do 3 týdnů. Ikterické období. Významné rozdíly v izolaci patogenu u pacientů s ikterickou, žloutenkou a asymptomatickými formami hepatitidy A nebyly zjištěny. Metoda infekce je fekálně-orální, hlavně vodná, a také domácí a stravovací cesty. Metoda infekce je fekálně-orální, hlavně vodná, a také domácí a stravovací cesty. Hlavním (primárním) způsobem přenosu viru je voda. Je také možné infikovat vzduchem. Vnímavost obyvatelstva je univerzální. Většinou děti mladší 14 let jsou nemocné. Nemoc má výraznou podzimní a zimní sezónnost.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Symptomy hepatitidy A

Inkubační doba se pohybuje v rozmezí od 15 do 50 dní, v závislosti na velikosti dávky infikování virem, ale v průměru o 28-30 dnů. Poté, co v těle, viru hepatitidy A replikuje v regionálních lymfatických uzlin, do krve a potom se jaterní buňky a způsobuje difúzní akutní hepatitida, která je doprovázena poškození jaterních hepatocytů a retikuloendotelových buněk a snížení jeho detoxikační a bariérové funkce. Poškození hepatocytů dochází tedy v důsledku přímého působení viru, v důsledku imunopatologických mechanismů. Nejtypičtější obraz hepatitidy A je akutní ikterická cyklická forma: Inkubační doba je prodromální (preicteric), žloutenka a rekonvalescence období. Nicméně, v ohniscích infekce ukazuje velký počet pacientů s asymptomatickou a anicteric formy infekce, jejichž počet převažuje nad Ikterické ( „ledovém fenomén“).

Postinfekční imunita je silná a dlouhodobá, způsobená virem neutralizujícími protilátkami a imunitními paměťovými buňkami.

Mikrobiologická diagnostika hepatitidy A

Diagnóza hepatitidy A (s výjimkou infekcí zvířat - šimpanzů marmozet, paviánů, které jsme) na základě různých imunologických metod: DGC imunofluorescenční metodou, hemaglutinaci imunitní adheze (komplex virového antigenu + protilátky v přítomnosti komplementu adsorbovaného na erytrocytech a způsobuje jejich přilnavosti) . Nicméně použitelnost těchto metod je omezena kvůli nedostatku specifických virových antigenů a imunofluorescenční reakce vyžaduje jaterní biopsie, což je nežádoucí. Spolehlivá a specifická je metoda imunní elektronové mikroskopie, ale je velmi namáhavá. Z tohoto důvodu, dokud jedinou přijatelnou metodou pro imunologické reakce je immunosorbent assay pevné fáze ve formě IPM, nebo RIM, a to zejména v modifikaci „zachycení“ imunoglobulinu M. V naší zemi pro tento účel navrženo testovacího systému - „DIAG-A-GEO“. Pracovní princip tohoto testovacího systému je následující. Na stěnách polystyrenu lunochek sorbován první protilátek na imunoglobuliny třídy M (antiimmunoglobuliny M) se přidá do zkoumaného séra pacienta. Je-li třída IgM, budou vázat na protilátky-Ti-M, potom se dá do určité virového antigenu (virus hepatitidy A), která se získává pěstováním v buněčné kultuře. Systém se promyje a přidávají se antivirové protilátky označené křenovou peroxidázou. Pokud dojde ke vzájemné interakci všech čtyř komponent systému, vznikne čtyřvrstvý "sendvič":

• antiimunoglobuliny M,
• imunoglobuliny M (proti viru hepatitidy A - v testovaném séru pacienta),
• virový antigen,
• antivirové protilátky značené enzymem.

K detekci tohoto komplexu se do lunet přidává substrát pro enzym. Pod vlivem enzymu se zničí a vytvoří se barevný produkt. Intenzita barvy může být kvantitativně měřena spektrofotometrem nebo fotokolimetrem.

Výhodou metody "zachycení" IgM je to, že protilátky této třídy imunoglobulinů se objevují v primární imunitní odpovědi a indikují aktivní stadium infekce, zmizí po přenesené nemoci. Antivirová protilátka patřící do třídy IgG naopak dlouhodobě přetrvává po onemocnění a zajišťuje získanou imunitu. Pro detekci viru hepatitidy A se navrhuje metoda sondy DNA: Jako sonda se používá komplementární sonda vRNA.

Léčba hepatitidy A

Vzhledem k tomu, že v virové hepatitidy sníženou produkci interferonů, hepatitida A léčba založena na použití interferonu induktor a její endogenní syntézu amiksin.

Specifická prevence hepatitidy A

Dříve široce používány seroprevention hepatitidy A za použití y-globulin nebylo odůvodněno, nicméně, důraz byl kladen na držení imunizaci provádí očkování proti hepatitidě A. Za tímto účelem se vyvíjejí a již se používají různé varianty vakcín. V Rusku byla v roce 1995 získána účinná vakcína proti hepatitidě A a nyní byla úspěšně aplikována.