13c ureázový test: příprava, výsledky, pozitivita, negativita

Od objevení bakterie Helicobacter pylori spojené s chronickou gastritidou a žaludečními a dvanáctníkovými vředy byly vyvinuty diagnostické metody, včetně ureázového testu, který umožňuje detekci těchto mikroorganismů u konkrétního pacienta, potvrzení jejich účasti na rozvoji gastrointestinálních onemocnění a předepsání účinné léčby.

Ureázový enzym jako biomarker infekce Helicobacter

Bakterie H. pylori se chrání před kyselým prostředím v lumen žaludku dvěma způsoby. Zaprvé, poškozením sliznice svými bičíky se mikroorganismy dostanou do jejích spodních vrstev, až k epiteliálním buňkám, kde je pH vyšší (tj. kyselost je nižší). Zadruhé, bakterie neutralizují kyselinu syntézou velkého množství katalyticky aktivního vysokomolekulárního metaloenzymu ureázy neboli močovinové amidohydrolázy.

Použití ureázy v diagnostice Helicobacter je možné nejen díky cytoplazmatické aktivitě tohoto enzymu, ale také díky vnější interakci s hostitelskými buňkami.

Působením ureázy dochází k rozkladu močoviny v žaludku na nitrid vodíku (amoniak) a oxid uhličitý (oxid uhličitý). Ty reagují s kyselinou chlorovodíkovou v žaludeční šťávě a vytvářejí zónu neutrální kyselosti kolem H. pylori a také podporují metabolismus bakteriálních buněk.

Proto je ureáza nejdůležitějším faktorem kolonizace H. pylori v lidské žaludeční sliznici a detekce ureolytické aktivity je považována za biomarker virulence této bakterie, který gastroenterologové – provedením ureázového testu – používají k diagnostice infekce Helicobacter a také ke sledování výsledků léky indukované destrukce (eradikace) bakterií.

Diagnostika H. pylori zahrnuje invazivní a neinvazivní testy – v závislosti na tom, zda je či není nutné endoskopické vyšetření žaludku (fibrogastroduodenoskopie). Invazivní test je rychlý ureázový test nebo expresní ureázový test (RUT-test), který vyžaduje odběr vzorků tkáně (biopsie). Nejběžnějším neinvazivním testem je 13C ureázový dechový test (13C-UBT).

Je třeba poznamenat, že neinvazivní diagnostiku H. pylori lze provést pomocí krevního testu na protilátky (specifičnost na úrovni 75 %, citlivost - 84 %), ELISA testu v moči (s citlivostí 96 % a specificitou 79 %) a koprogramu na bakteriální antigeny. Více informací - Infekce Helicobacter pylori: protilátky proti Helicobacter pylori v krvi

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Indikace postupu test ureázy

Kolonizace žaludeční sliznice bakterií H. pylori sama o sobě není onemocněním, je faktorem zvýšené bakteriální zátěže organismu, což za určitých podmínek může vyvolat rozvoj řady patologií žaludku a horní části gastrointestinálního traktu.

Indikace pro diagnostiku infekce Helicobacter, zejména ureázový test, jsou spojeny s gastritidou se zvýšenou kyselostí, antrální a atrofickou gastritidou, duodenitidou, žaludečním a dvanáctníkovým vředem, žaludečním MALT lymfomem. Po endoskopické resekci rakoviny žaludku v raném stádiu lze provést histologické vyšetření v kombinaci s rychlým ureázovým testem - FGDS s ureázovým testem.

Gastroenterologové mohou předepsat ureázový test, pokud si pacienti stěžují na pocit těžkosti a nepohodlí v epigastrické oblasti, časté pálení žáhy po jídle, kyselé nebo shnilé říhání, hořkost v ústech, nevolnost, střevní poruchy, bolesti nebo křeče v žaludku.

[ 8 ], [ 9 ]

Příprava

Příprava na dechový test s močovinou 13C spočívá v tom, že pacient vysadí: užívání antibiotik 4 týdny před testem a NSAID, inhibitory protonové pumpy (snižující kyselost žaludku) a antacida nebo adsorbenty používané na pálení žáhy - nejméně dva týdny předem. Užívání jakýchkoli léků by mělo být vysazeno pět až šest dní a pití alkoholu a kouření - tři dny před testem.

Také se doporučuje vyhýbat se konzumaci luštěnin asi týden před testováním, protože fazole, hrách, čočka, sója a fazole obsahují ureázu (která chrání rostliny před chorobami a hmyzím škůdcem).

Večer před testem je kontraindikována pozdní vydatná večeře, v den testování byste měli provádět běžnou ústní hygienu a hodinu a půl před testem byste neměli nic pít ani používat žvýkačky.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Technika test ureázy

Technika provedení:

• Nejprve se odebere základní vzorek dechu – výdech se naplní do měkké plastové nádoby (a hermeticky se uzavře);
• tekutina s přídavkem 13C-močoviny se užívá perorálně;
• Po 25–30 minutách se odebere druhý vzorek vydechovaného vzduchu do jiné nádoby.

Takto získané vzorky se analyzují na hmotnostním spektrometru se separací izotopů ve druhém vzorku a stanovením jejich koncentrace. Rozdíl mezi hodnotami ve druhém a prvním vzorku se vyjadřuje jako delta (δ) oproti základní úrovni. Normální hodnoty, tj. negativní hodnoty značeného atomu 13C u neinfikovaných pacientů, se pohybují v rozmezí 0,15-0,46 % a pozitivní hodnoty za přítomnosti infekce jsou 1,2-9,5 % s rychlostí hydrolýzy močoviny vyšší než 12-14 μg/min.

Jednoduše řečeno: detekce oxidu uhličitého značeného 13C ve vydechovaném vzduchu naznačuje, že močovina byla hydrolyzována ureázovým enzymem H. pylori, což ve skutečnosti potvrzuje její přítomnost v žaludku.

Dechový test na H. pylori

13C-UBT test neboli 13C ureový dechový test na Helicobacter pylori je jednou z nejdůležitějších neinvazivních metod pro detekci této infekce: se 100% citlivostí a 98% specificitou je riziko falešně pozitivních a falešně negativních výsledků ve srovnání s histologickým vyšetřením a testováním protilátek v krvi o 2,3 % nižší.

Analýza je založena na hydrolýze perorálně podané tekuté močoviny značené atomem uhlíku (stabilní neradioaktivní izotop) 13C (50–75 mg 13C-močoviny zředěné ve 100 ml tekutiny) ureázou H. pylori.

Močovina značená izotopovým indikátorem podléhá v žaludku hydrolýze za uvolnění amoniaku a oxidu uhličitého obsahujícího značené atomy, který difunduje do krve a vylučuje se z plic během dýchání. Značený oxid uhličitý je zaznamenáván analytickým zařízením - hmotnostním spektrometrem, jehož činnost je založena na nedisperzní izotopově selektivní spektroskopii, nebo infračerveným spektroskopickým analyzátorem.

Rychlý ureázový test

Rychlý ureázový test (RUT) se provádí během endoskopického vyšetření žaludku a dvanáctníku – pomocí moderních endofibroskopů – a simultánního odběru vzorků biopsie. Biomateriál se odebírá z antrální části žaludku. Fibrogastroduodenoskopie neboli FGDS s ureázovým testem je tedy invazivní diagnostická metoda.

Získaný biopsický materiál je kompletně ponořen do připraveného standardizovaného média obsahujícího agarový gel, močovinu, acidobazický indikátor fenolsulfoftalein a bakteriostatické činidlo (přidané k prevenci růstu kontaminujících mikroorganismů a falešně pozitivních výsledků).

Pokud jsou ve vzorku žaludeční tkáně přítomny bakterie H. pylori, ureáza, kterou produkují, hydrolyzuje močovinu a zvyšuje pH, což je jasně viditelné, když se indikátor změní ze žluté na oranžovou (při pH 6,8) a fialovou (při pH > 8). 75 % pozitivních testů změní barvu během 120–180 minut a čím rychleji indikátor změní barvu, tím větší je počet bakterií. Testy, které se zdají být negativní, se však uchovávají 24 hodin.

Pozitivní rychlý ureázový test, co to znamená? Pozitivní RUT test – indikátor zčervená – znamená, že vzorek biopsie umístěný do agarového média obsahuje nejméně 105 bakterií H. pylori, i když jejich koncentrace je obvykle vyšší.

Citlivost různých modifikací testů se pohybuje v rozmezí 90–98 % a specificita 97–99 %.

Jak poznamenali gastroenterologové, pokud pacientovo vyšetření ukazuje ostře pozitivní ureázový test (tři křížky), znamená to: pH > 8 a indikátor změnil barvu za méně než 60 minut od okamžiku ponoření bioptického vzorku, což naznačuje velký počet H. pylori a vysokou hladinu exprese ureázy. Přibližný počet bakterií lze spočítat během histologického vyšetření bioptického vzorku pod mikroskopem a pokud v zobrazené oblasti přesáhne 40-50, je úroveň infekce považována za vysokou.

Dechový test s močovinou 13C zřídka dává falešně pozitivní výsledky a u pacientů s podezřením na žaludeční nebo dvanáctníkový vřed se pro potvrzení diagnózy považuje jeden pozitivní test, zatímco negativní výsledek by měl být potvrzen EGD s močovinovým testem.