Mikrobiologické vyšetření sputa

Mikrobiologické vyšetření je nejdůležitějším článkem v diagnostickém hledání a ověřování původce pneumonie. Zahrnuje nejen izolaci původce, ale také studium jeho vlastností, včetně citlivosti na různé léky s baktericidním a bakteriostatickým účinkem.

K tomuto účelu se používá metoda setí sputa na různá živná média. Ve vzorku sputa dodaném do laboratoře se odeberou hnisavé shluky a pečlivě se promyjí v Petriho misce izotopovým roztokem chloridu sodného, což do určité míry umožňuje jejich uvolnění od mikroflóry horních cest dýchacích. Setí hnisavých shluků sputa se provádí na různá živná média, jejichž složení je popsáno ve speciálních příručkách o mikrobiologii. Média s sety se inkubují při 37,5 °C po dobu 24 hodin. Z rostoucích kolonií se izolují čisté kultury, identifikují se známými mikrobiologickými metodami a stanoví se jejich citlivost na antibiotika.

Pro stanovení kvantitativního obsahu mikroorganismů se sputum homogenizuje, smíchá s živným bujónem a ze směsi se připraví následná desetinásobná ředění, která se naočkují na Petriho misky s krevním agarem. Po 24 hodinách inkubace při 37,5 °C se zohlední výsledky, přičemž se počítájí kolonie stejného typu co do vzhledu a bere se v úvahu stupeň ředění materiálu. Z kolonií se připraví nátěry a vyšetří se pod mikroskopem.

Interpretace výsledků

Interpretace výsledků mikrobiologického vyšetření sputa je poměrně složitá, což je vysvětleno řadou faktorů. Výše již bylo zmíněno neustálé osevávání bronchiálního obsahu mikroflórou horních cest dýchacích a ústní dutiny a častá přítomnost většiny nejtypičtějších původců respiračních onemocnění (pneumokoky, streptokoky, stafylokoky atd.) v normálním tracheobronchiálním obsahu zdravých lidí. V tomto ohledu izolace asociace různých mikroorganismů ve sputu během mikrobiologických studií, z nichž většina je v tomto konkrétním případě oportunních, extrémně ztěžuje stanovení původce onemocnění. Proto je pro interpretaci výsledků mikrobiologického vyšetření sputa nutné vzít v úvahu kvantitativní převahu určitého typu bakterií (více než 106 ^-107 mc ^/ ml), výskyt určitých mikroorganismů ve fázi exacerbace a jejich vymizení během období remise. Je velmi důležité vzít v úvahu klinický obraz onemocnění.

Hlavní a možní původci různých klinických forem pneumonie

Klinická forma pneumonie	Hlavní patogeny	Možné patogeny
Záškrt	Pneumokoky	Streptokoky, Klebsiella
Po chřipce	Stafylokoky, pneumokoky, klebsiella	Haemophilus influenzae, streptokoky
Abscesování	Stafylokoky, bakteroidy, smíšená flóra	Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa
Aspirace	Bakteroidy, anaerobní streptokoky	Stafylokoky, pneumokoky
Pooperační	Stafylokoky	Pneumokoky, Klebsiella
Vsunutá reklama	Mykoplazmy	Původci ornitózy a psitakózy
Sekundární pneumonie u hospitalizovaných pacientů bez předchozí antibakteriální léčby	Stafylokoky, pneumokoky, klebsiella, bakteroidy	Escherichia coli, serratia atd.
Sekundární pneumonie vyvinutá na pozadí antibakteriální terapie	Fakultativní patogenní mikroorganismy	Pseudomonas, Serratia, Klebsiella, Staphylococcus, Proteus atd.
U pacientů s chronickou bronchitidou	Pneumokoky, Haemophilus influenzae	Stafylokoky, streptokoky
U pacientů s alkoholismem	Pneumokoky, Haemophilus influenzae, Klebsiella	E. coli, prvoci
U syndromu získané imunodeficience	Pneumocystis, houby	Cytomegaloviry
U pacientů, jejichž péči poskytují externí osoby	Pneumokoky, stafylokoky, hemofilní papila	Klebsiella, Escherichia coli

Při kvantitativním hodnocení výsledků studie mikrobiální kontaminace u pacientů s pneumonií je nutné pamatovat na extrémně vysokou citlivost tohoto indikátoru na předepisování antibiotik. I krátkodobá léčba antibakteriálními léky může vést k prudkému poklesu mikrobiální kontaminace, což neumožňuje adekvátní posouzení výsledků vyšetření sputa. Proto je vhodné sputum odebrat před předepsáním antibiotické léčby.

Je třeba také poznamenat, že pro kultivaci intracelulárních patogenů pneumonie (mykoplazma, legionella, chlamydie, rickettsie) se používají speciální selektivní živná média. Rutinní mikrobiologické testování s použitím konvenčních živných médií (agar-agar) nikdy nedává pozitivní výsledky. Proto by volba specifických metod mikrobiologického testování měla být prováděna za účasti ošetřujícího lékaře, který je povinen informovat laboratorního lékaře o svých podezřeních ohledně možné role intracelulárních patogenů ve výskytu pneumonie u tohoto pacienta.

Je třeba dodat, že v reálné klinické praxi i technicky dokonalé mikrobiologické vyšetření sputa umožňuje identifikovat patogen ve více než 40–60 % případů. Proto lze k ověření patogena použít i jiné moderní výzkumné metody. Informační obsah bakteriologické studie lze výrazně zvýšit použitím tracheobronchiálního aspirátu, tekutiny získané během bronchoalveolární laváže (BAL), bronchoskopie atd., namísto sputa jako zkoumaného biologického materiálu.

Kromě toho lze k identifikaci patogenů pneumonie použít metodu imunofluorescence různých biologických materiálů (bronchoskopický materiál, krev, pleurální obsah atd.), PCR diagnostické metody a studium hladiny specifických protilátek v krevním séru. Tyto diagnostické metody bohužel dosud nenašly široké klinické uplatnění a v současné době se používají pouze ve velkých specializovaných centrech a laboratořích.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]