Konfokální mikroskopie

Konfokální mikroskopie je nyní považována za jednu z nejslibnějších metod zobrazování kůže in vivo, a proto je zájem o ně jak mezi kliniky, tak mezi zástupci vědeckých výzkumných ústavů neobvykle vysoký.

[1], [2], [3], [4]

Konfokální mikroskopické schopnosti

V dermatologii se konfokální laserová mikroskopie používá pro:

• zkoumat průnik sloučenin do kůže (průnikové cesty, kinetika, distribuce v kůži);
• pozorování žláz (definice aktivního a pasivního stavu);
• studie mikrocirkulačního lůžka (včetně reálného času);
• diagnostika novotvarů.

Bez diskuse o výhodách a nedostatcích výše uvedených odrůd konfokální mikroskopie si všimneme, že v posledních letech získala fluorescenční laserová konfokální mikroskopie rostoucí popularitu.

[5], [6], [7],

Konfokální mikroskopie pro kožní vyšetření

Konfokální mikroskopie poskytuje dva neocenitelné příležitosti - studium tkání na buněčné úrovni, ve stavu fyziologického života a ukázky výsledků výzkumu (tj buněčná aktivita ..) ve čtyřech rozměrech - výška, šířka, hloubka a čas. Pro kvalitu obrazu a hloubku studia hraje nejdůležitější roli schopnost tkání přenášet světlo, jinými slovy transparentnost. Metoda konfokální mikroskopie je bezkontaktní, paprsek světla nezpůsobuje pacientovi ani experimentálnímu zvířeti žádné poškození nebo nepohodlí.

Pro studium kůže se používá konfokální skenovací laserová mikroskopie (CSLM). Metoda umožňuje vidět epidermis a papilární dermis vrstvu s rozlišením blízko k histologické. Všechny výsledky průzkumu jsou zobrazeny na monitoru a uloženy jako soubor obrazových souborů (ve formě mikrofilmu (v dynamice) nebo mikrofotografií).

Existují dva typy metod:

• Reflexní (odrazivost CSLM) - je založen na skutečnosti, že různé intracelulární a mezibuněčné struktury mají odlišný index refrakce světla, což umožňuje získat kontrastní obraz.
• Fluorescenční (fluorescence CSLM) - používá laserové světlo proniká kůží a stimulace ji nebo exo endohromofory který reagoval začne emitovat fotony (tj fluoreskují ..).

Boční rozlišení je minimální vzdálenost mezi body umístěnými ve vodorovné rovině, tj. Rovinu rovnoběžnou s povrchem kůže. Axiální rozlišení je minimální vzdálenost mezi body umístěnými v rovině kolmé k povrchu kůže.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Historie konfokální mikroskopie

Myšlenka vytvoření mikroskopu schopného na buněčné úrovni ukázat intravitální řez živé tkáně byla aktivně vyvinuta před 130 lety. Hlavní prvek moderních mikroskopů byl navržen na konci 19. Století a byl to rotační disk s nejmenšími otvory spirálovitě umístěnými. Tento disk byl vynalezen v roce 1883 německým studentem Paul Nipkovem, na počest kteréhož získal jeho jméno - Nipkov disk (nebo nipkov disk). Vynález byl založen na schopnosti světla procházet nejmenšími otvory v kotouči a zvětšovací čočky pronikat do hloubky tkáně a osvětlit fragment buněk ve vzdálenosti od povrchu. Když se disk rychle otáčí, fragmenty se přidávají k celkovému obrázku. Odstraněním nebo přibližováním struktury k objektu se může měnit hloubka optické části testované tkáně.

Teprve s příchodem VTR v 80. Letech a počítači schopnými zpracovávat obrazy, na počátku devadesátých let existovala reálná příležitost vytvořit a efektivně použít ty moderní mikroskopy, které se dnes používají.