Vitamín A v krvi

Referenční hodnoty (normální) hladiny vitaminu A (retinolu) v krevním séru: děti 1-6 let - 0,7 až 1,5 mol / l, 7-12 - 0,91-1,71 mmol / l, 13 -19 let - 0,91-2,51 μmol / l; u dospělých je 1,05-2,09 μmol / l.

Vitamin A se týká rozpustných v tucích a existuje ve dvou formách - skutečný vitamin A nebo retinol (nalezeno pouze v živočišných produktů) a provitamin A, známý jako karoten (připraven z živočišného nebo rostlinného původu), které mohou být převedeny na retinol ve stěnách zažívacího traktu. Přibližně 50 až 90% retinolu příchozí potraviny je absorbována v tenkém střevě a přepravovány v chylomikronech spojených s komplexem do jater, kde je uložen ve formě retinolpalmitát. V případě potřeby se uvolňuje do krevního oběhu ve formě retinolu, který je v kombinaci s proteinem vázajícím vitamín A. V séru se vitamin A-vázající protein + retinolový komplex váže na transtyretin. Ze séra je retinol zachycen cílovými buňkami, jako jsou retinální fotoreceptory a epitelium.

Když vitamín A vstupuje do těla nad rámec požadavků (180-430 μg retinolu denně v závislosti na věku, pohlaví a fyziologickém stavu), jeho přebytek je uložen v játrech, které tvoří depot tohoto vitaminu. Se sníženým příjmem retinolu z jídla se jeho zásoby jater uvolňují do krevního oběhu a udržují koncentraci retinolu v séru v normální hladině (nad 0,7 μmol / l). Dalšími biologicky aktivními formami vitaminu A (retinální a retinové kyseliny) jsou přítomny v krvi ve velmi nízkých koncentracích (pod 0,35 μmol / l); na estery retinolu tvoří přibližně 5% celkového obsahu vitaminu A (0,1-0,1 μmol / l).

Vitamin A má důležitou roli v procesech snižování oxidace. Retinol podporuje tvorbu glykogenu v játrech a svalech, podporuje zvýšení cholesterolu v krvi, podílí se na syntéze steroidů a pohlavních hormonů. To je nutné pro růst a tvorbu kostí skeletu resyntézou rhodopsin, a také přispívá k normálnímu fungování sliznice a epitelu krytu kůže, brání jeho metaplazie, hyperkeratóza a nadměrné odlupování. Vitamin A pomáhá posilovat vlasy, zuby a dásně. V posledních letech se ukazuje, pestrý role vitaminu A v prevenci rakoviny a regulaci imunity (nezbytné pro dokončení fagocytózy, zvyšují syntézu Ig, stimuluje produkci zabíječských T lymfocytů, stimuluje typ T-helper II a kol.). Vitamin A - aktivní antioxidant, který působí především v přítomnosti vitamínu E; chrání vitamin C před oxidací. Nedostatek vitaminu A je považován za rizikový faktor pro maligní novotvary. V experimentálních studiích bylo prokázáno, že zvýšení obsahu vitaminu A ve stravě zvyšuje střední životnost o 17,5%. Zinek je nezbytným kofaktorem metabolismu vitaminu A (nezbytný pro syntézu bílkoviny vázající vitamín A).

Průměrná denní potřeba retinolu pro dospělé (20-50 let) je 1,2 mg (4000 IU, 1 IU odpovídá 0,3 μg retinolu), u těhotných žen - 1,5 mg (5000 IU), kojení - 1, 8 mg (6000 IU), u lidí nad 60 let - 2,5 mg (10 000 IU). Alespoň třetina denní potřeby retinolu by měla být dodána tělu v hotové formě; zbytek se může absorbovat použitím karotenoidů, které tvoří v těle retinol. Je třeba mít na paměti, že přibližně 30% retinolu v potravinách je zničeno tepelným ošetřením. Aktivita retinolu je 2krát vyšší než karoten, navíc je pouze 30-40% absorbováno do střeva. Proto při posuzování příjmu potravy se předpokládá, že 1 mg retinolu přibližně odpovídá 6 mg karotenoidů.

Stanovení retinolu (vitaminu A) a karotenoidů v séru podle Besseyho v modifikaci LA Anisimova

Princip metody

Stanovení vitaminu A a karotenoidů je založeno na jejich hydrolýze v roztoku alkalického alkoholu, po kterém následuje extrakce směsí organických rozpouštědel.

Reagencie

• 11 M roztok hydroxidu draselného (KOH).
• 96% ethylalkoholu.
• 1 M roztok hydroxidu draselného (KOH) v 96% ethanolu: 1 objem roztoku 11 M KOH se smísí s 10 objemy 96% ethanolu. Reagens je připraven v den studie. Pokud dojde k barvení během míchání, musí být alkohol před použitím vyčištěn destilací.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Směs xylenu a oktanu: připravená smícháním stejných objemů xylenu a oktanu.

Vyšetřování se provádí na spektrofotometru.

Průběh stanovení vitamínu A

Krev odebraná z prstu (asi 1 ml) se vloží do štítku odstředivky a umístí se do skleněné misky s teplou vodou (teplota 40-45 ° C) po dobu 20 až 30 minut. K oddělování séra je krevní sraženina pečlivě navinutá kolem okraje zkumavky pomocí tenké skleněné tyčinky a centrifugována při 3000 otáčkách za minutu po dobu 10 minut.

Zvolte 0,12 ml séra a přeneste jej do aglutinační zkumavky, poté přidá 0,12 ml 1M roztoku hydroxidu draselného. Obsah je pečlivě otřesen.

Zkušební zkumavky se sondami se umístí do vodní lázně po dobu 20 minut při teplotě 60 ° C pro hydrolýzu.

Vzorky se ochladí a přidá se k ně 0,12 ml směsi xylenu a oktanu, intenzivně se protřepe po dobu 10 až 15 sekund. Znovu vychladnout a odstředit.

Opatrně odstraňte horní vrstvu obsahující vitamín A a karotenoidy pipetou Pasteur s gumovou plechovkou a přeneste ji do mikročástic.

Vzorky jsou spektrofotometrické při vlnové délce 328 nm - k určení obsahu vitaminu A a při vlnové délce 460 nm - k určení karotenoidů.

Po spektrum je studován vzorek podroben ultrafialovému záření pro destrukci vitaminu A. Za tímto účelem je ve vzdálenosti 15-20 cm od křemenné microcuvettes nastavené (baktericidní) světlometu tak, že ozařování vystavena část kyvety, naplněné kapalinou; doba expozice 45-60 minut.

Vzorky jsou opakovaně spektrofotometrické při vlnové délce 328 nm. Obsah vitaminu A se stanoví z rozdílu v hodnotách zániku (optická hustota) s přihlédnutím k koeficientu (faktoru) 637 vypočítanému společností Bessey pro vitamín A.

Výpočet se provádí podle vzorce:

X = 637 × (Е328 (1) - E328 (2)),

Kde X je obsah vitaminu A, μg / dL; 637 je koeficient vypočítaný Besseyem pro stanovení vitamínu A; E328 (1) - optická hustota roztoku před ozařováním; E328 (2) je optická hustota roztoku po ozáření.

Koeficient pro přenos koncentrace vitaminu A z μg / dL v μmol / l je 0,035.

Obsah karotenoidů se vypočítá podle vzorce:

X = 480-E480,

Kde X je obsah karotenoidů, μg / dL; 480 je koeficient vypočítaný Besseyem pro stanovení karotenoidů; E480 je optická hustota zkušebního roztoku.

Poznámka:

Podle Besseyho mohou být během studií pořizovány větší nebo menší sérové objemy, ale jeho poměr k objemu alkoholového roztoku by měl být konstantní při jakékoliv změně objemu (množství) směsi xylenu a oktanu.

Norma v obsahu vitaminu A v krevním séru je: u novorozenců a kojenců - 160-270 μg / l; u dospělých 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Obsah karotenoidů v dospělém séru je 800-2300 μg / l.