PCR jako metoda diagnostiky genetických onemocnění
Naposledy posuzováno: 23.04.2024
Veškerý obsah iLive je lékařsky zkontrolován nebo zkontrolován, aby byla zajištěna co největší věcná přesnost.
Máme přísné pokyny pro získávání zdrojů a pouze odkaz na seriózní mediální stránky, akademické výzkumné instituce a, kdykoli je to možné, i klinicky ověřené studie. Všimněte si, že čísla v závorkách ([1], [2] atd.) Jsou odkazy na tyto studie, na které lze kliknout.
Pokud máte pocit, že některý z našich obsahů je nepřesný, neaktuální nebo jinak sporný, vyberte jej a stiskněte klávesu Ctrl + Enter.
PCR je nový úspěch v molekulární genetice, používaný pro amplifikaci DNA a umožňuje, aby specifická část DNA (tj. Jakýkoli požadovaný gen) byla rychle replikována in vitro více než 200 000krát. Pro provedení této reakce stačí mít DNA z jedné buňky; množství DNA amplifikované pomocí PCR je tak velké, že tato DNA může být prostě barvena (za použití radioaktivních sond po elektroforéze není zapotřebí). Předpokladem pro provedení PCR je znalost nukleotidové sekvence amplifikované DNA oblasti pro správný výběr uměle syntetizovaných primerů.
V současné době, PCR je proces, který se vyskytuje v jedné zkumavce a skládající se z opakujících se cyklů amplifikace (reprodukce, kopie) specifických DNA sekvencí, aby se získal dostatečně velký počet kopií, které mohou být identifikovány pomocí elektroforézy. Jedním z klíčových součástí reakce - „primery“ - syntetické oligonukleotidy skládající se z 20-30 bází komplementárních „stránky“ (oblasti), teplotní hybridizace (spojení) k identifikovatelné části templátu DNA.
PCR probíhá automaticky v programovatelném termostatu - termocykleru (termocykleru). Třístupňový cyklu, ve kterém jsou repliky získá identifikovatelné části templátové DNA, byl opakován 30-50 krát v souladu s předem stanoveným programem termocykleru. V prvním cyklu oligoprimer hybridizovat s původní templátové DNA, a pak (v následujících cyklech) a nově syntetizované DNA molekul, jako je jejich akumulace v reakční směsi. V druhém případě, syntéza DNA nekončí v důsledku teplotních změn, a při dosažení zesíleného hraniční oblast DNA polymerázu, která určuje velikost nově syntetizovaného DNA oblasti, aby v rámci jednoho nukleotidu.
Jako metoda detekce získaných molekul DNA se používá elektroforéza, pomocí které se amplifikovaný materiál dělí podle velikosti ampliconů (produkty amplifikace).
Pomocí PCR je možné přímo prozkoumat místa lokalizace předpokládaných mutací nebo polymorfních míst a také studovat přítomnost jakýchkoli jiných specifických znaků DNA.
[