Lékařský expert článku
Nové publikace
PCR jako metoda diagnostiky genetických onemocnění
Naposledy posuzováno: 04.07.2025
Veškerý obsah iLive je lékařsky zkontrolován nebo zkontrolován, aby byla zajištěna co největší věcná přesnost.
Máme přísné pokyny pro získávání zdrojů a pouze odkaz na seriózní mediální stránky, akademické výzkumné instituce a, kdykoli je to možné, i klinicky ověřené studie. Všimněte si, že čísla v závorkách ([1], [2] atd.) Jsou odkazy na tyto studie, na které lze kliknout.
Pokud máte pocit, že některý z našich obsahů je nepřesný, neaktuální nebo jinak sporný, vyberte jej a stiskněte klávesu Ctrl + Enter.
PCR je nový výdobyt molekulární genetiky, používaný k amplifikaci DNA a umožňující rychlé in vitro množení specifické oblasti DNA (tj. jakéhokoli sledovaného genu) více než 200 000krát. K provedení reakce stačí mít DNA materiál z jedné buňky; množství DNA amplifikované pomocí PCR je tak velké, že tuto DNA lze jednoduše obarvit (použití radioaktivních sond po elektroforéze není nutné). Předpokladem pro provedení PCR je znalost nukleotidové sekvence amplifikované oblasti DNA pro správný výběr uměle syntetizovaných primerů.
V současné době je PCR proces v jedné zkumavce sestávající z opakovaných cyklů amplifikace (reprodukce, kopírování) specifické sekvence molekuly DNA za účelem získání dostatečně velkého počtu kopií, které lze identifikovat elektroforézou. Jednou z klíčových složek reakce jsou „primery“ – syntetické oligonukleotidy sestávající z 20–30 bází komplementárních k „místům“ (oblastem) navázání (připojení) na identifikované oblasti matrix DNA.
PCR probíhá automaticky v programovatelném termostatu - termocykleru (amplifikátoru). Třístupňový cyklus, jehož výsledkem jsou přesné kopie identifikovaného úseku matrixové DNA, se opakuje 30–50krát v souladu se zadaným programem termocykleru. V prvním cyklu oligoprimery hybridizují s původní matrixovou DNA a poté (v následujících cyklech) s nově syntetizovanými molekulami DNA, jak se hromadí v reakční směsi. V druhém případě syntéza DNA nekončí v důsledku změny teploty, ale po dosažení limitu DNA polymerázy amplifikovaného úseku, který určuje velikost nově syntetizovaného úseku DNA s přesností na jeden nukleotid.
Jako metoda pro detekci získaných molekul DNA se používá elektroforéza, s jejíž pomocí se amplifikovaný materiál separuje podle velikosti amplikonů (amplifikačních produktů).
PCR lze použít k přímému zkoumání lokalizace podezřelých mutací nebo polymorfních míst, stejně jako ke studiu přítomnosti jakýchkoli dalších specifických znaků DNA.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]