PCR hepatitidy C

HCV v materiálu obvykle chybí.

Na rozdíl od sérologických metod diagnostiky virové hepatitidy C, které detekují protilátky proti HCV, umožňuje PCR přímo detekovat přítomnost HCV RNA a kvantifikovat její koncentraci v testovaném materiálu. Test má druhovou specificitu a vysokou citlivost: k její detekci stačí deset molekul HCV RNA v testovaném materiálu. Detekce protilátek proti HCV pouze potvrzuje fakt infekce pacienta, ale neumožňuje posoudit aktivitu infekčního procesu (replikaci viru) a prognózu onemocnění. Protilátky proti HCV jsou navíc detekovány jak v krvi pacientů s akutní a chronickou hepatitidou, tak i u pacientů, kteří byli nemocní a zotavili se, a protilátky v krvi se často objevují až několik měsíců po nástupu klinického obrazu onemocnění, což komplikuje diagnostiku. Detekce HCV v krvi pomocí PCR je informativnější diagnostická metoda. Detekce HCV RNA v PCR indikuje virémii, umožňuje posoudit replikaci viru v těle a slouží jako jedno z kritérií účinnosti antivirové terapie. Detekce HCV RNA pomocí PCR v raných stádiích virové infekce při naprosté absenci jakýchkoli sérologických markerů může sloužit jako nejranější důkaz infekce. Izolovaná detekce HCV RNA při naprosté absenci jakýchkoli jiných sérologických markerů však nemůže zcela vyloučit falešně pozitivní výsledek PCR. V takových případech je nutné komplexní vyhodnocení klinických, biochemických a morfologických studií s opakovaným vícenásobným potvrzením přítomnosti infekce pomocí PCR.

Použití metody PCR u pacientů s chronickou virovou hepatitidou C má velký význam, protože u většiny z nich chybí korelace mezi přítomností virové replikace a aktivitou jaterních enzymů. V takových případech nám pouze PCR umožňuje posoudit přítomnost virové replikace, zejména pokud je konečný výsledek vyjádřen kvantitativně. Ve většině případů onemocnění dochází k vymizení HCV RNA z krevního séra později než k normalizaci jaterních enzymů, takže jejich normalizace nemůže sloužit jako základ pro ukončení antivirové léčby.

Z praktického hlediska je důležité vyšetřovat nejen krevní sérum, ale i lymfocyty a vzorky hepatobiopsie metodou PCR k detekci HCV RNA. Viry lze detekovat 2–3krát častěji v jaterní tkáni než v krevním séru. Při hodnocení výsledků testu HCV RNA v krevním séru je třeba mít na paměti, že virémie může mít kolísavý charakter (stejně jako změny aktivity enzymů). Proto po pozitivních výsledcích PCR testu může být získán negativní výsledek a naopak. V takových případech je lepší vyšetřit vzorky hepatobiopsie, aby se vyřešily případné pochybnosti.

Detekce HCV RNA v materiálu pomocí PCR se používá k následujícím účelům:

• řešení sporných výsledků sérologických testů;
• diferenciace virové hepatitidy C od jiných forem hepatitidy;
• identifikace akutního stadia onemocnění ve srovnání s předchozí infekcí nebo kontaktem; stanovení stadia infekce novorozenců od HCV-seropozitivních matek;
• sledování účinnosti antivirové léčby.

Pacienti s podezřením na virovou hepatitidu C:

• dárci;
• osoby s rizikovými faktory;
• jedinci se zvýšenou aktivitou ALT;
• pacientů s akutní hepatitidou

Všechny výše uvedené vlastnosti hodnocení výsledků a přístupy k diagnostice HCV pomocí PCR platí i pro jiné infekce.

Metoda PCR umožňuje nejen detekovat HCV RNA ve studovaném materiálu, ale také stanovit jeho genotyp. Stanovení genotypu viru má velký význam pro výběr pacientů s chronickou virovou hepatitidou C k léčbě interferonem alfa a ribavirinem. Laboratorní indikace pro léčbu chronické virové hepatitidy C interferonem alfa jsou následující:

• zvýšená aktivita transamináz;
• přítomnost HCV RNA v krvi;
• HCV genotyp 1;
• vysoká virémie v krvi (více než 8×10⁶ ^kopií /ml).

V současné době je možné kvantitativně stanovit obsah HCV RNA v krevním séru pomocí metody PCR, což má velký význam pro sledování léčby interferonem alfa. Úroveň virémie se hodnotí následovně: s obsahem HCV RNA od 102 ^do 104 ^kopií /ml - slabá; od ¹⁰⁵ do 107 ^kopií /ml - průměrná, nad 108 ^kopií /ml - vysoká. Při účinné léčbě se úroveň virémie snižuje.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]