Konfokální mikroskopie

Konfokální mikroskopie je v současnosti považována za jednu z nejslibnějších metod pro zobrazování kůže in vivo, a proto je o ni neobvykle vysoký zájem jak mezi klinickými lékaři, tak i zástupci výzkumných ústavů.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Možnosti konfokální mikroskopie

V dermatologii se konfokální laserová mikroskopie používá k:

• studium penetrace sloučenin do kůže (cesty penetrace, kinetika, distribuce v kůži);
• pozorování fungování žláz (stanovení aktivního a pasivního stavu);
• studie mikrocirkulačního řečiště (včetně studií v reálném čase);
• diagnostika novotvarů.

Aniž bychom diskutovali o výhodách a nevýhodách výše uvedených typů konfokální mikroskopie, poznamenáváme, že v posledních letech se stále více těší oblibě fluorescenční laserová konfokální mikroskopie.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokální mikroskopie pro vyšetření kůže

Konfokální mikroskop poskytuje dvě neocenitelné možnosti - studium tkání na buněčné úrovni ve stavu fyziologické životně důležité aktivity a demonstraci výsledků studie (tj. buněčné aktivity) ve čtyřech rozměrech - výšce, šířce, hloubce a čase. Pro kvalitu obrazu a hloubku studie hraje nejdůležitější roli schopnost tkáně propouštět světlo, jinými slovy její průhlednost. Metoda konfokální mikroskopie je bezkontaktní, světelný paprsek nezpůsobuje žádnou újmu ani nepohodlí vyšetřovanému pacientovi ani experimentálnímu zvířeti.

K vyšetření kůže se používá konfokální skenovací laserová mikroskopie (CSLM). Tato metoda umožňuje vidět epidermis a papilární vrstvu dermis s rozlišením blízkým histologickému. Všechny výsledky vyšetření se zobrazují na monitoru a ukládají jako balíček obrazových souborů (jako mikrofilm (v dynamice) nebo mikrofotografie).

Existují dva typy metody:

• reflexní (reflexní CSLM) - založený na skutečnosti, že různé intracelulární a mezibuněčné struktury mají různé indexy lomu světla, což umožňuje získat kontrastní obraz.
• fluorescence (fluorescence CSLM) - využívá laserové světlo, které proniká kůží a excituje v ní exo- nebo endochromofory, které v reakci začnou emitovat fotony (tj. fluoreskují).

Laterální rozlišení je minimální vzdálenost mezi body umístěnými v horizontální rovině, tj. rovině rovnoběžné s povrchem kůže. Axiální rozlišení je minimální vzdálenost mezi body umístěnými v rovině kolmé k povrchu kůže.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Historie konfokální mikroskopie

Myšlenka vytvoření mikroskopu schopného zobrazit řez živé tkáně na buněčné úrovni se aktivně rozvíjela před 130 lety. Hlavním prvkem moderních mikroskopů byl navržen na konci 19. století a byl to rotující disk s drobnými otvory uspořádanými do spirály. Tento disk vynalezl v roce 1883 německý student Paul Nipkow, po kterém byl pojmenován - Nipkowův disk (nebo Nipkowův disk). Vynález byl založen na schopnosti světla, procházejícího drobnými otvory v disku a zvětšovací čočkou, pronikat hluboko do tkáně a osvětlovat fragment buňky v určité vzdálenosti od povrchu. Když se disk rychle otáčí, fragmenty tvoří jeden obraz. Pohybem struktury od objektu nebo blíže k němu je možné měnit hloubku optického řezu studované tkáně.

Teprve s příchodem videorekordérů v 80. letech 20. století a počítačů schopných zpracovávat obrazy na začátku 90. let 20. století bylo možné vytvořit a efektivně používat moderní mikroskopy, které se používají dodnes.