Imunofenotyp hemoblastóz

Významný pokrok v hematologických studií sdružených v posledních letech s využitím moderních imunologických metod a automatizované nástroje pro analýzu a třídění buněk periferní krve a kostní dřeně - cytometrech průtoku. Tradiční morfologické a cytochemické studie onemocnění substrátu buněk (krev, červené kostní dřeně, lymfatických uzlin, sleziny, atd.), V mnoha případech, zejména v lymfoproliferativní onemocnění, neukazují celou řadu možností mezi morfologicky podobných formách a identifikovat původ patologického klonu . Tyto problémy lze řešit pouze studiem imunologických vlastností buněk. Každý stupeň diferenciace hematopoetických buněk má svůj vlastní soubor antigenů, které jsou na mezinárodní klasifikace známé jako diferenciace a diferenciace jsou rozděleny do shluků, určeného CD.

V bloku diferenciaci neoplastických změn může nastat v jakékoli fázi normálního vývoje buněk, což má za následek buněčného klonu patologického definování onemocnění substrátu a mající charakteristiku stejný imunologický (nebo fenotypové). Po studium těchto markerů v buňkách může být určena jakoukoli formou nebo provedením onemocnění jsou shodné, tj. Na základě imunologické fenotypu buňky diferenciální diagnostiku, které je nejobtížnější v lymfoproliferativních poruch, protože hlavní buněčný substrát patologických onemocnění jsou téměř stejný typ buněk morfologicky.

Fenotypizace umožňuje použití monoklonální protilátky typické blastické buňky a zralé myeloidní krev, mono-, lymfocytární série v přítomnosti diferenciačních antigenů (receptory) v buněčné stěně. V části "Hodnocení imunitního stavu organismu" jsou částečně popsány vlastnosti a diagnostická významnost buněčných markerů. Níže je uveden stručný popis antigenních buněčných markerů aplikovaných na diagnostiku hemoblastózy. Na membránách krvinek a červené kostní dřeně lze identifikovat následující antigeny (markery).

• CD2 je monomerní transmembránový glykoprotein. Je přítomen na povrchu všech cirkulujících T-lymfocytů a některých NK-lymfocytů. CD2 se účastní procesu alternativní aktivace T-lymfocytů. Detekce CD2 pomocí monoklonálních protilátek v klinické praxi se používá pro fenotyp akutních T-buněčných leukemií, lymfomů, chronických zánětlivých a imunodeficientních stavů.
• CD3 - proteinový komplex spojený s antigenem specifickým T-buněčným receptorem, je hlavním funkčním markerem T-lymfocytů. Umožňuje přenos aktivačního signálu z membrány do cytoplazmy buňky. Stanovení CD3 indikován pro diagnózu akutní leukémie T-buněk, lymfomy (CD3 není exprimován v non-T-buněk lymfoidních nádorů) a imunodeficience onemocnění.
• CD4 - transmembránový glykoprotein exprimován podmnožinu T-helper (indukční cívky), která tvoří 45% lymfocytů periferní krve. V raných fázích vývoje lymfocytů v thymu, CD4 antigeny, jakož i CD8, vyjádřený všechny kortikální lymfocyty. Medulární thymocytů, který je podobný fenotyp zralých CD4 + periferní krve T-buněk (T-helper buňky), a to buď již exprimují CD4 nebo CD8 receptory. V periferní krvi je současně označeno CD4 a CD8 až 5% buněk. Mírná exprese CD4 je možná u některých monocytových buněk. CD4 je exprimován ve většině případů, T-buněčného lymfomu, včetně mycosis fungoides, a HTLV-spojená T buněk leukémie (HTLV - lidský T-lymfotropický virus - lidský T-lymfotropní virus).
• CD5 - glykoprotein s jedním řetězcem, přítomný na všech zralých T-lymfocytech a většině thymocytů, je slabě exprimován B-lymfocyty. CD5 je detekován na neoplastických buňkách chronické lymfocytární leukémie a centrocytického lymfomu B-buněk. U jiných typů maligních lymfoidních onemocnění - folikulární lymfom, leukémie chlupatých buněk, velký buněčný lymfom - CD5 není exprimován.
• CD7 je jednovláknový protein, nejstarší marker diferenciace T buněk. Vyjadřuje se pro-T-lymfocyty ještě předtím, než migrují na thymus. CD7 se detekuje na většině NK buněk, na monocytech je zaznamenána slabá exprese. B-lymfocyty a granulocyty neobsahují tento antigen. Definice CD7 se používá pro diagnostiku lymfomů, dětské T-buněčné lymfoblastické leukémie.
• CD8 je protein sestávající ze dvou polypeptidových řetězců spojených disulfidovými můstky. Je exprimován subpopulací cytotoxických a supresorových T lymfocytů, které obsahují 20-35% lymfocytů periferní krve. Tento antigen má také NK lymfocyty, kortikální thymocyty, 30% medulárních tymocytů a subpopulaci buněk červené kostní dřeně. CD8 se zkoumá pro kvantitativní vyhodnocení obsahu T-supresoru (viz část "Supresory T-lymfocytů v krvi" výše).

• CD10 je endopeptidáza spojená s buněčnou membránou. CD10 exprimuje mladé formy B lymfocytů a subpopulaci kortikálních lymfocytů. CD10 exprimuje všechny buňky ALL.
• CD11c exprimují na buněčné membráně makrofágy, monocyty, granulocyty, NK buňky a buňky leukémie vlasatých buněk.
• CD13 - glykoprotein exprimován buňkami myelomonocytické řady (progenitorové buňky, neutrofily, bazofily, eosinofily, monocyty a buňky myeloidní leukémie). Není přítomen v T a B lymfocytech, erytrocytech a krevních destičkách.
• CD14 je glykoprotein povrchové membrány. Vyjadřují se hlavně monocyty a makrofágy. CD14 je detekován ve více než 95% monocytech periferní krve a kostní dřeně. Při akutní myeloblastické leukémii je pozorována silná exprese CD14. U akutní a chronické lymfoblastické leukémie není tento antigen exprimován.
• CD15 je oligosacharid. Podílí se na procesech fagocytózy a chemotaxe. Tento antigen je přítomen na povrchu zralých granulocytů a buněk Berezovskij-Sternberga. Exprese antigenu CD15 je detekována u Hodgkinovy nemoci. U non-Hodgkinových lymfomů není ve většině případů detekován CD15.
• CD16 je exprimován na povrchu granulocytů, monocytů, makrofágů a NK buněk. Všechny lymfocyty exprimující tento antigen mají schopnost buněčné cytotoxicity závislé na protilátce. CD16 se určuje při psaní chronických myelocytárních leukémií k charakterizaci NK buněk.
• CD19 je glykoprotein přítomný na všech periferních B lymfocytech, stejně jako na všech prekurzorech B-buněk. V plazmatických buňkách chybí. Toto je nejstarší značka B-buněk, hraje důležitou roli při regulaci aktivace a proliferace B-lymfocytů. CD19 je exprimován na všech neoplastických buňkách akutní leukémie B-buněčného původu a je přítomen také u některých forem akutní monoblastické leukémie.
• CD20 je neglykosylovaný protein. Ontogenezi B-lymfocytů CD20 antigenu CD19 po kroku diferenciace pre-B-lymfocytů se objeví. Absentuje na plazmatické membráně plazmatických buněk. Vyjádřená v ALL, B-buněčnou chronickou lymfocytární leukémie, leukémie vlasových buněk, Burkittův lymfom, a velmi zřídka - akutní leukémie monoblastny.
• CD21 je glykoprotein, ve významném množství je přítomen na B-lymfocytech v lymfatických orgánech a v malém množství na B-buňkách periferní krve. CD21 je receptor pro virus Epstein-Barr.
• CD22 je protein sestávající ze dvou polypeptidových řetězců. Vyjadřuje se na membráně většiny B-lymfocytů, včetně progenitorových buněk (prolymphocytů). Antigen není po aktivaci exprimován na B-lymfocytech (plazmatické buňky). Nejvýraznější Exprese CD22 na buňkách detekovaných leukémie vlasových buněk, slabý - s myeloidní leukémie a non-T-buněk ALL.
• CD23 je glykoprotein exprimovaný aktivovanými B-lymfocyty periferní krve v mnohem větší míře. CD23 zprostředkuje cytotoxicitu a fagocytózu závislou na IgE makrofágy a eozinofily.
• CD25 je glykoprotein s jedním řetězcem identifikovaný jako receptor s nízkou afinitou pro IL-2. Tento receptor je exprimován na aktivovaných T-lymfocytech a při nižší hustotě na aktivovaných B-buňkách. V periferní krvi zdravých lidí je antigen přítomen ve více než 5% lymfoidních buněk.
• CD29 je fibronektinový receptor. Je široce distribuován v tkáních, je exprimován leukocyty. Detekce CD29 u periferních krevních buněk se používá k typizaci subpopulace T buněk s fenotypem CD4 + CD29 +, které se nazývají pomocník typu 2 (Th2). Tyto buňky, prostřednictvím produkce lymfokinů, se podílejí na realizaci humorální imunitní odpovědi.
• CD33 je transmembránový glykoprotein. Je přítomen na povrchu buněk myeloidní a monocytární řady. Na povrchu monocytů a v menší míře na granulocytech periferní krve. Přibližně 30% buněk červené kostní dřeně exprimuje CD33, včetně myeloblastů, promyelocytů a myelocytů. Antigen chybí na membránách pluripotentních kmenových buněk. CD33 se používá k charakterizaci buněk v myeloidních leukémiích. Leukemické buňky lymfatického a erythroidního původu nevyjadřují CD33.
• CD34 je fosfoglykoprotein, exprimovaný hematopoetickými progenitorovými buňkami, včetně monopotézních kmenových buněk. Nejvýraznější exprese Ar je pozorována u raných progenitorů; Když buňky zrají, výraz markeru spadne. CD34 se také nachází na endotelových buňkách. CD34 se používá k charakterizaci buněk v akutní myelogenní a lymfoblastické leukémii. U chronické lymfocytární leukémie a lymfomů není exprese CD34 antigenu detekována.

• CD41a je exprimována destičkami a megakaryocyty. Pro diagnostiku megakaryoblastické leukémie se používají monoklonální protilátky pro detekci CD41a. Při Glązmannově trombasténií je exprese tohoto antigenu nepřítomná nebo výrazně potlačena.
• CD42b je membránový glykoprotein sestávající ze dvou polypeptidových řetězců. Značka se nachází na povrchu krevních destiček a megakaryocytů. V klinické praxi se detekce CD42b používá k diagnostice trombocytopatie - Bernardova-Soulierova syndromu.
• CD45RA patří do třídy transmembránových glykoproteinů. To je běžný leukocytový antigen. Vyjadřuje se na buněčné membráně B lymfocytů, v menší míře na T-lymfocytech a na zralých medulárních tymocytech. Marker není exprimován granulocyty.
• CD45RO je nízkomolekulární izoforma CD45RA - běžný leukocyt Ag. Objevují se na T-buňkách (paměťové T-lymfocyty), na subpopulacích B-lymfocytů, monocytech a makrofágách. Monoklonální protilátky proti CD45RO interagují s většinou thymocytů, subpopulací klidných CD4 + a CD8 + T-lymfocytů a zralých aktivovaných T-buněk. Buňky myelomonocytického původu, granulocyty a monocyty také nesou tento antigen. Detekuje se v centroblastických a imunoblastických lymfomech.
• CD46 - O-glykosylovaný dimer. To je široce distribuován v tkáních a vyjádřil T- a B-lymfocyty, monocyty, granulocyty, NK buňky, krevní destičky, endotelové buňky, fibroblasty, ale je přítomno na povrchu erytrocytů. CD46 poskytuje ochranu tkání proti komplementu.
• CD61 je antigen trombocytů. Vyjadřuje se na destičkách periferní krve a červené kostní dřeně, stejně jako na megakaryocytech a megakaryoblastech. Jeho definice se používá jako marker akutní megakaryoblastické leukémie. Exprese antigenu chybí nebo je potlačena u pacientů s Glanzmannovou thrombasténií.
• CD95, také známý jako Fas nebo APO-1, - je transmembránový glykoprotein, člen rodiny nádorového nekrotického faktoru receptorů. To je vyjádřeno ve významných množstvích v T-lymfocytů (CD4 + a CD8 +) periferní krve a, v menší míře, B-lymfocyty a NK buňky. Tento antigen je také exprimován na granulocytech, monocytech, tkáňových buňkách a neoplastických buňkách. Vazba CD95 na ligand Fas (CD95L) indukuje apoptózu v buňkách.
• CD95L nebo Fas ligand, membránový protein patřící do rodiny receptorů faktoru nekrózy nádorů. Tento antigen je exprimován cytotoxickými T lymfocyty, NK buňkami a velmi často nádorovými buňkami; hlavní induktor apoptózy v buňkách.
• HLA-DR je monomorfní determinant molekul třídy II hlavního lidského histokompatibilního komplexu (HLA). Marker je exprimován na Langerhansovy buňky, dendritické buňky lymfatických orgánech, a některé typy makrofágy, B lymfocytech, aktivovaných T-buněk a thymu epitelové buňky. Test pro tento marker se používá pro kvantifikaci aktivovaných T-lymfocytů s fenotypem CD3 + HLA-DR +.

Pomocí odlišného výběru monoklonálních protilátek k markerům je možné vytvořit fenotypový portrét buněk charakteristických pro danou formu leukémie.

Kromě použití imunofenotypizace techniky pro diagnostiku a diferenciální diagnostiku hematologických malignit, zejména důležité ukázalo jejich použití v procesu léčby k posouzení stavu remise a zbytkové populace leukemických buněk. Vědět fenotypové „portrét“ z vysokých buněk v době stanovení diagnózy, s těmito značkami je možné najít mobilní leukemické klon v remisi, az nárůstu jejich počtu - předvídat vývoj relaps dlouhý (pro 1-4 měsíců), dokud její klinické a morfologické rysy.

[1], [2], [3], [4],