Vitamin A v krvi

Referenční hodnoty (norma) pro koncentraci vitaminu A (retinolu) v krevním séru: u dětí 1-6 let - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 let - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 let - 0,91-2,51 μmol/l; u dospělých - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamin A je vitamin rozpustný v tucích a existuje ve dvou formách: samotný vitamin A neboli retinol (nachází se pouze v živočišných produktech) a provitamin A, známý jako karoten (získaný ze živočišných a rostlinných produktů), který se může ve stěnách trávicího traktu přeměnit na retinol. Přibližně 50–90 % retinolu přijatého v potravě se vstřebává v tenkém střevě a transportuje se v komplexu vázaném na chylomikron do jater, kde se ukládá jako retinol palmitát. V případě potřeby se uvolňuje do krevního oběhu jako retinol v komplexu s proteinem vázajícím vitamin A. V krevním séru se komplex proteinu vázajícího vitamin A a retinolu váže na transthyretin. Z krevního séra je retinol přijímán cílovými buňkami, jako jsou fotoreceptory sítnice a epitelu.

Pokud tělo přijímá vitamín A v množství přesahujícím potřebné množství (180–430 mcg retinolu denně v závislosti na věku, pohlaví a fyziologickém stavu), jeho přebytek se ukládá v játrech a tvoří depot tohoto vitamínu. Při snížení příjmu retinolu potravou se jeho zásoby z jater uvolňují do krevního oběhu, čímž se koncentrace retinolu v krevním séru udržuje na normální úrovni (nad 0,7 μmol/l). Další biologicky aktivní formy vitamínu A (retinal a kyselina retinová) jsou v krvi přítomny ve velmi nízkých koncentracích (pod 0,35 μmol/l); estery retinolu tvoří přibližně 5 % celkového vitamínu A (0,1–0,17 μmol/l).

Vitamin A hraje důležitou roli v oxidačně-redukčních procesech. Retinol podporuje tvorbu glykogenu v játrech a svalech, pomáhá zvyšovat obsah cholesterolu v krvi a podílí se na syntéze steroidních a pohlavních hormonů. Je nezbytný pro růst a formování kosterního systému, resyntézu rodopsinu a také podporuje normální funkci sliznic a kožního epitelu, čímž zabraňuje její metaplazii, hyperkeratóze a nadměrnému olupování. Vitamin A pomáhá posilovat vlasy, zuby a dásně. V posledních letech byla prokázána rozmanitá role vitaminu A v prevenci rakoviny a regulaci imunity (je nezbytný pro dokončení fagocytózy, zvyšuje syntézu Ig, stimuluje tvorbu T-killerů, stimuluje T-helpery typu II atd.). Vitamin A je aktivní antioxidant, působící hlavně v přítomnosti vitaminu E; chrání vitamin C před oxidací. Nedostatek vitaminu A je považován za rizikový faktor pro vznik maligních nádorů. Experimentální studie ukázaly, že zvýšení obsahu vitaminu A ve stravě zvyšuje střední délku života o 17,5 %. Zinek je nezbytným kofaktorem v metabolismu vitaminu A (nezbytný pro syntézu proteinu vázajícího vitamin A).

Průměrná denní potřeba retinolu pro dospělé (20-50 let) je 1,2 mg (4000 IU, 1 IU odpovídá 0,3 mcg retinolu), pro těhotné ženy - 1,5 mg (5000 IU), pro kojící ženy - 1,8 mg (6000 IU), pro osoby starší 60 let - 2,5 mg (10 000 IU). Alespoň třetina denní potřeby retinolu by měla být tělu dodávána v hotové formě; zbytek lze pokrýt konzumací karotenoidů, ze kterých se retinol v těle tvoří. Je třeba vzít v úvahu, že přibližně 30 % retinolu v potravinách se během tepelného zpracování ničí. Aktivita retinolu je 2krát vyšší než aktivita karotenu a navíc se ve střevě vstřebává pouze 30-40 % druhého. Proto se při hodnocení stravy předpokládá, že 1 mg retinolu odpovídá přibližně 6 mg karotenoidů.

Stanovení retinolu (vitaminu A) a karotenoidů v krevním séru podle Besseyho metody v modifikaci L. A. Anisimovové

Princip metody

Stanovení vitaminu A a karotenoidů je založeno na jejich hydrolýze v alkalickém alkoholovém roztoku s následnou extrakcí směsí organických rozpouštědel.

Reagencie

• 11M roztok hydroxidu draselného (KOH).
• 96% etylalkohol.
• 1M roztok hydroxidu draselného (KOH) v 96% ethylalkoholu: 1 objem 11M roztoku KOH se smíchá s 10 objemy 96% ethylalkoholu. Činidlo se připraví v den studie. Pokud se během míchání objeví zbarvení, měl by být alkohol před použitím vyčištěn destilací.
• Xylen, chemicky čistý
• Oktan, chemicky čistý
• Směs xylenu a oktanu: připraví se smícháním stejných objemů xylenu a oktanu.

Studie se provádějí pomocí spektrofotometru.

Proces stanovení vitaminu A

Krev odebraná z prstu (asi 1 ml) se umístí do centrifugační zkumavky a poté se na 20–30 minut umístí do skleněného kalíšku s teplou vodou (teplota 40–45 °C). Pro oddělení séra se krevní sraženina opatrně oddělí od okraje stěn zkumavky tenkou skleněnou tyčinkou a centrifuguje se při 3000 ot/min po dobu 10 minut.

Odebere se 0,12 ml séra a přenese se do aglutinační zkumavky, kam se poté přidá 0,12 ml 1 M roztoku hydroxidu draselného v alkoholu. Obsah se důkladně protřepe.

Zkumavky se vzorky se umístí na 20 minut do vodní lázně o teplotě 60 °C, aby se provedla hydrolýza.

Vzorky se ochladí a přidá se k nim 0,12 ml směsi xylen-oktanu a důkladně se třepou po dobu 10–15 s. Znovu se ochladí a centrifugují.

Horní vrstva obsahující vitamín A a karotenoidy se opatrně odstraní pomocí Pasteurovy pipety s gumovou balonkou a přenese do mikrokyvet.

Vzorky se spektrofotometricky analyzují při vlnové délce 328 nm pro stanovení vitaminu A a při vlnové délce 460 nm pro stanovení karotenoidů.

Po spektrofotometrii jsou vzorky vystaveny ultrafialovému záření, aby se zničil vitamin A. Za tímto účelem se ve vzdálenosti 15–20 cm od mikrokyvet instaluje křemenná (baktericidní) lampa tak, aby část kyvety naplněná kapalinou byla vystavena záření; doba ozařování je 45–60 minut.

Vzorky jsou znovu spektrofotometricky analyzovány při vlnové délce 328 nm. Obsah vitaminu A je stanoven rozdílem hodnot extinkčního záření (optická hustota) s přihlédnutím k koeficientu (faktoru) 637 vypočítanému Besseyem pro vitamin A.

Výpočet se provádí podle vzorce:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Kde X je obsah vitaminu A, μg/dl; 637 je koeficient vypočítaný Besseyem pro stanovení vitaminu A; E328(1) je optická hustota roztoku před ozářením; E328(2) je optická hustota roztoku po ozáření.

Koeficient pro převod koncentrace vitaminu A z µg/dL na µmol/l je 0,035.

Obsah karotenoidů se vypočítá pomocí vzorce:

X = 480-E480,

Kde X je obsah karotenoidů v μg/dl; 480 je koeficient vypočítaný Besseyem pro stanovení karotenoidů; E480 je optická hustota testovaného roztoku.

Poznámka

Podle Besseyho lze při provádění výzkumu použít větší nebo menší objem séra, ale jeho poměr k objemu alkoholového roztoku musí být konstantní při jakékoli změně objemu (množství) směsi xylen-oktan.

Normální obsah vitaminu A v krevním séru je: u novorozenců a kojenců - 160-270 μg/l; u dospělých - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Obsah karotenoidů v krevním séru dospělých je 800-2300 μg/l.