Lékařský expert článku
Nové publikace
Polymerázová řetězová reakce (PCR) v diagnostice infekčních onemocnění
Naposledy posuzováno: 05.07.2025
Veškerý obsah iLive je lékařsky zkontrolován nebo zkontrolován, aby byla zajištěna co největší věcná přesnost.
Máme přísné pokyny pro získávání zdrojů a pouze odkaz na seriózní mediální stránky, akademické výzkumné instituce a, kdykoli je to možné, i klinicky ověřené studie. Všimněte si, že čísla v závorkách ([1], [2] atd.) Jsou odkazy na tyto studie, na které lze kliknout.
Pokud máte pocit, že některý z našich obsahů je nepřesný, neaktuální nebo jinak sporný, vyberte jej a stiskněte klávesu Ctrl + Enter.
PCR je jednou z metod diagnostiky DNA, která umožňuje milionkrát zvýšit počet kopií detekovaného úseku genomu (DNA) bakterií nebo virů pomocí enzymu DNA polymerázy. Testovaný úsek nukleové kyseliny specifický pro daný genom se mnohokrát znásobí (amplifikuje), což umožňuje jeho identifikaci. Nejprve se molekula DNA bakterií nebo virů zahřátím rozdělí na dva řetězce, poté se za přítomnosti syntetizovaných DNA primerů (nukleotidová sekvence je specifická pro určovaný genom) navážou na komplementární úseky DNA a po každém primeru se za přítomnosti termostabilní DNA polymerázy syntetizuje druhý řetězec nukleové kyseliny. Získá se tak dvě molekuly DNA. Proces se mnohokrát opakuje. Pro diagnostiku stačí jedna molekula DNA, tj. jedna bakterie nebo virová částice. Zavedení dalšího kroku do reakce - syntézy DNA na molekule RNA pomocí enzymu reverzní transkriptázy - umožnilo testovat RNA viry, například virus HCV. PCR je třístupňový proces, který se cyklicky opakuje: denaturace, navázání primerů, syntéza (polymerace) DNA. Syntetizované množství DNA se identifikuje pomocí ELISA nebo elektroforézy.
PCR může využívat různé biologické materiály - krevní sérum nebo plazmu, seškrab z močové trubice, biopsii, pleurální tekutinu, mozkomíšní mok atd. PCR se primárně používá k diagnostice infekčních onemocnění, jako je virová hepatitida B, virová hepatitida C, virová hepatitida D, CMV infekce, pohlavně přenosné infekce (kapavka, chlamydie, mykoplazmatické, ureaplazmatické infekce), tuberkulóza, HIV infekce atd.
Výhoda PCR v diagnostice infekčních onemocnění oproti jiným výzkumným metodám je následující:
- infekční agens lze detekovat v jakémkoli biologickém prostředí těla, včetně materiálu získaného během biopsie;
- je možné diagnostikovat infekční onemocnění v nejranějších stádiích onemocnění;
- je možné kvantitativně vyhodnotit výsledky výzkumu (kolik virů nebo bakterií je obsaženo ve studovaném materiálu);
- vysoká citlivost metody; například citlivost PCR pro detekci DNA viru hepatitidy B v krvi je 0,001 pg/ml (přibližně 4×10² kopií /ml), zatímco citlivost metody hybridizace DNA s použitím rozvětvených sond je 2,1 pg/ml (přibližně 7×10³ kopií /ml).
[