Karyotypizace

Pro studium chromozomů se často používají krátkodobé krevní kultury, stejně jako buňky kostní dřeně a fibroblastové kultury. Krev dodaná do laboratoře s antikoagulantem se podrobí odstředění pro srážení červených krvinek a leukocyty se inkubují v kultivačním médiu po dobu 2-3 dnů. Fytochemaglutinin se přidává do vzorku krve, protože zrychluje aglutinaci erytrocytů a stimuluje rozdělení lymfocytů. Nejvhodnější fází pro studium chromozomů je metafáze mitózy, proto se kolchicin používá k zastavení rozdělení lymfocytů v této fázi. Přidání tohoto léčiva do kultury vede ke zvýšení podílu buněk, které jsou v metafázi, tj. Ve fázi buněčného cyklu, kdy jsou chromozomy nejlépe vidět. Každý chromozóm se replikuje (produkuje vlastní kopii) a po vhodném zbarvení je viditelný ve formě dvou chromatidů připojených k centroméru nebo centrálnímu zúžení. Buňky se pak ošetřují hypotonickým roztokem chloridu sodného, fixují se a barví se.

Pro barvení chromozomů se častěji používá barvivo Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomin nebo 2% acetazarin. Omezují chromozomy úplně, jednotně (rutinní metoda) a mohou být použity k identifikaci číselných anomálií lidských chromozomů.

Pro získání detailního obrazu struktury chromozomů, identifikace (určení) jednotlivých chromozomů nebo jejich segmentů se používají různé metody diferenciálního barvení. Nejčastěji používané metody jsou Giemsa, stejně jako G-a Q-ohýbání. Mikroskopické vyšetření léku podél délky chromozomu odhaluje řadu barvených (heterochromatinových) a nelakovaných (euchromatinových) pásů. Charakter příčného řezu získaný v tomto případě umožňuje identifikovat každý chromozom v sadě, protože střídání pruhů a jejich velikosti jsou pro každý pár striktně individuální a konstantní.

Jsou fotografovány metaphasové desky jednotlivých buněk. Jednotlivé chromozomy jsou vyříznuty z fotografií a vkládány na list papíru; takový obraz chromozomů se nazývá karyotyp.

Použití dodatečného barvení, stejně jako nové metody pro získání chromozomálních preparátů, které umožňují dloužení dlouhých chromozomů, významně zvyšují přesnost cytogenetické diagnostiky.

Zvláštní nomenklatura byla vyvinuta pro popis lidského karyotypu. Normální karyotyp muže a ženy je označen jako 46, XY a 46, XX. V Downově syndromu, charakterizovaném přítomností dalšího chromozomu 21 (trisomie 21), je karyotyp žen popisován jako 47, XX 21+ a muži - 47, XY, 21+. Při přítomnosti strukturální anomálie chromozomu je nutné označit změněné dlouhé nebo krátké rameno: písmeno p označuje krátké rameno, q dlouhé rameno a translokaci. Takže když je odstraněno krátké rameno chromozomu 5 (syndrom kočky), je ženský karyotyp popsán jako 46, XX, 5p-. Matka dítěte s translokací Downův syndrom - nosičem vyvážené translokace 14/21 má karyotyp 45, XX, t (14q, 21q). Translokační chromozom se vytváří při spojení dlouhých ramen chromozomu 14 a 21, krátké ramena se ztrácejí.

Každé rameno je rozděleno na okraje a naopak - na segmenty a ty a ostatní jsou označeny arabskými číslicemi. Centromery chromozomu jsou výchozím bodem pro počítání oblastí a segmentů.

Pro topografii chromozomů se tedy používají čtyři markery: číslo chromozomu, symbol ramen, číslo okruhu a číslo segmentu v daném regionu. Například 6p21.3 záznam znamená, že hovoříme o 6. Chromozómu pár, své krátké rameno, oblasti 21, segmentu 3. Existuje více volitelných znaků, zejména pter - konec krátkého ramene, qter - na konci dlouhého ramene.

Metoda cytogenetického výzkumu umožňuje detekovat delece a další změny v chromozomech pouze ve velikosti asi 1 milionu bází (nukleotidů).

[1], [2], [3], [4]