Hemopoetické kmenové buňky pupečníkové krve

Pupočková krev působí jako zdroj hematopoetických kmenových buněk na schopnostech proliferace a repopulace hematopoetických buněk. Bylo opakovaně prokázáno, že v době podání obsahuje pupečníková krev dostatečně velký počet špatně postižených hematopoetických progenitorových buněk. Někteří autoři se domnívají, že výhodou transplantace hematopoetických kmenových buněk pupočníkové krve je to, že není třeba hledat donor kompatibilní s antigeny HLA. Podle nich nezralost imunitního systému způsobuje, že novorozence snížená funkční aktivitu imunokompetentních buněk, a tedy nižší než v transplantaci kostní dřeně, byla incidence závažného reakce „štěp versus hostitel“. V tomto transplantaci buněk přežití pupečníkové krve není nižší než buňky kostní dřeně, a to i v případě použití menšího počtu GSK podávaného na 1 kg hmotnosti pacienta. Nicméně, podle našeho názoru optimální počet otázek transplantovány pupečníkové krve buňky nezbytné pro efektivní štěpu v těle příjemce, jejich imunologickou kompatibilitu a řadu dalších aspektů transplantace krvetvorných kmenových buněk pupečníkové krve vyžaduje mnohem vážnější analýzu.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Získání hematopoetických kmenových buněk pupečníkové krve

Postup pro získání krvetvorných kmenových buněk z pupečníkové krve vyžaduje jeho příjem ihned po narození a jeho oddělení od placenty, kdy placenta v děloze nebo ex děloze, stejně jako pro císařským řezem, ale také ex utero. Je ukázáno, že v případě, že zkrácení doby od narození novorozeným tím, placentární separace až 30 sekund objemu pupečníkové krve získaných zvyšuje v průměru o 25-40 ml. Při pozdějším postupu se ztrácí stejné množství krve. Je zjištěno, že předčasné odloučení dítěte od pozdějšího vzplanutí nemá pro novorozence žádné negativní důsledky.

Ruská Výzkumný ústav hematologie a krevní transfuze vyvinut účinný a nízkými náklady technologie pro pupečníkové krve při fyziologických linií ((70,2 + 25,8) ml) a císařským řezem ((73,4 + 25,1) ml). Způsob separace pupečníkové krve s dostatečně vysokým výtěžkem mononukleárních buněk a nukleaci - (83,1 + 9,6) a (83,4 + 14,1)%, v daném pořadí. Zlepšený způsob kryokonzervace pupečníkové krve, který zajišťuje vysokou bezpečnost mononukleárních buněk a CFU-GM - (96,8 + 5,7) a (89,6 + 22,6)%, v tomto pořadí. Byla stanovena účinnost odtokové metody odběru vzorku pupočníkové krve pomocí kontejneru "Kompoplast-300" (Rusko). Plotové pupečníkové krve autoři provádí ihned po porodu a její oddělení od placenty, pokud jde o umístění placenty v děloze nebo ex děloze. Před punkcí pupeční žíly pupeční šňůry jednou přidá 5% tinktura jódu, a pak dvakrát - 70% ethylalkoholu. Krev protékala spojovacími trubicemi k zásobníku spontánně. Trvání plotu trvalo ne více než 10 minut. 66 shromážděné metoda objem drenážní Vzorky pupečníkové krve v průměru (72 + 28) ml a počet leukocytů ve vzorku průměru plný - (1,1 + 0,6) x x 107. Analýza pupečníkové krve na sterilitu (bakteriální kontaminace, HIV-1, viry hepatitidy B a C, syfilis a cytomegalovirem infekce) v jediném vzorku byly identifikovány IgG-protilátky hepatitidy C v jiné studii jednou placenty po fetální povrch narození byl umístěn na speciálním rámu směrem dolů, byl kord upravován s 5% roztoku jod a 75% ethyl th alkohol. Umbilikální žíly jehlou vypustit z transfúzní systému (G16). Krev se vyprázdnila do zásobníku spontánně. Takto získaný objem krve byl průměrně (55 + 25) ml. Papír G. Koglerových et al (1996), pupečníkové krve vzít uzavřený způsob a získá velké objemy krve - v průměru (79 + 26) ml. Autoři na vědomí, že mezi 574 šňůry krevní vzorky obsahují přibližně 7% nižší než 40 ml krve, což neumožňuje jejich využití pro transplantaci. K. Isoyama et al (1996), přičemž se krev kabel aktivní exfusion za použití injekční stříkačky, obdržel v průměru 69,1 ml krve (objem pupečníkové krve se pohybovala od 15 do 135 ml). A konečně, A. Abdel-Mageed PI spolupracovníci (1997) od punovinnoy žilní katetrizace byly získány v průměru 94 ml pupečníkové krve (od 56 do 143 ml).

Aby se snížilo riziko iatrogenní infekce a kontaminace mateřských sekretů rozvinutých uzavřený systém sběru krve založený na široce používán transfuzioinoy systému Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), který obsahuje 62,5 ml CPDA (citrát-fosfát-dextrózu s adeninu), jak je antikoagulant. Technologie pro výrobu materiálu má prvořadý význam pro přípravu kvalitní vzorku vzhledem k množství obsahu a čistoty buněčné suspenze. Z existujících metod pupečníkové odběr krve, kotoryeuslovno klasifikovány do uzavřené, polootevřené a otevřený systém sleduetotdavat přednostně nejprve, jak je v uzavřeném systému, výrazně snižuje riziko mikrobiální kontaminace materiálu, jakož i znečištění buněčné suspenze z mateřské buňky.

A. Nagler a spoluautoři (1998) provedli komparativní analýzu účinnosti všech tří vzorkovacích systémů z pupečníkové krve. V první variantě byl postup proveden v uzavřeném systému exfuzí krve přímo do kontejneru. Ve druhé variantě byla pupočníková krev získána metodou aktivní krevní exfuze stříkaček1 s dalším promytím žil placenty a současným odtokem krve do kontejneru (otevřená metoda). Ve třetím variantě byla krev odebrána v polo-otevřeném systému tím, že ji aktivně extrahovala stříkačkami a promyla průdušnicí pupeční šňůry současným vyloučením do kontejneru. V prvním provedení, autoři získané v objemu pupečníkové krve (76,4 + 32,1) ml při obsahu leukocytů (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ v 1 ml krve. Ve druhém provedení, byly odpovídající hodnoty (174,4 + 42,8) ml a (8,8 + 3,4) x 10 ⁶ / ml; Třetí - (173,7 + 41,3) ml a (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Nejčastější infekce vzorků pupočníkové krve byla zaznamenána při použití otevřeného systému. Je zjištěna přímá korelace mezi hmotou placenty a objemem extrahované krve - se zvyšující se hmotností placenty se zvyšuje množství odebrané krve.

Po odběru vzorku pupečníkové krve se dělí separační krok - izolace mononukleárních buněk a čištění buněčné suspenze z erytrocytů. Za experimentálních podmínek jsou nukleované buňky izolovány metodou jejich sedimentace methylcelulózou během lýzy erythrocytů amonnými chloridem. Kvůli klinickým účelům by však neměla být použita methylcelulóza, protože ztráta hematopoetických kmenových buněk dosahuje 50-90%. Lýzou červených krvinek v souvislosti s velkými objemy pracovního roztoku na klinice také těžko provádí, i když procento separace tímto způsobem jaderných buněk s fenotypem CD34 + a progenitorové buňky CFU-GM funkce a CFU-GEMM podstatně vyšší. Bylo popsáno nové činidlo pro izolaci mononukleárních buněk v roztoku hustotní kupní síly (BDS72). Tato látka má následující fyziologické parametry: pH - 7,4, osmolalita - 280 mosmů / kg, hustota - 1,0720 g / ml. Podle autorů lze s pomocí této látky izolovat až 100% CD34-pozitivních buněk a odstranit 98% červených krvinek. Klinika však ještě neuplatňuje BDS72.

Tyto separační metody Testované jaderné buňky z pupečníkové krve se obvykle používá 10% roztok HES nebo 3% roztokem želatiny. Účinnost srážení erytrocytů a izolaci jaderných buněk v obou případech je přibližně stejná. Nicméně, v případě použití jako želatina sedimentující činidlo možné získat o něco větší počet CFU-GM, než při použití HES. Předpokládá se, že rozdíl v účinnosti zotavení CFU-GM nestejné rychlosti v důsledku ukládání jednotlivých frakcí nebo jaderné buňky výkonnostních HES molekul absorbovaných na hematopoietických buněčné povrchové receptory, a tak blokovat jejich citlivost na faktory stimulující kolonie, které se používají při kultivaci CFU-GM in vitro. Nicméně jak sedimenter může také být vhodné pro izolaci jaderných buněk při vytváření rozsáhlých banky pupečníkové krve.

Metody separace a kryokonzervace pupečníkové krve se v zásadě neliší od metod používaných při léčbě hematopoetických kmenových buněk periferní krve a kostní dřeně dospělých dárců. Ale při přípravě velkého množství vzorků krve z pupečníku pro své banky, metody oddělování musí být především nízké náklady. Proto v současné době, bohužel, potřeby pro klinické použití se ukázalo rutinní metody izolace a kryokonzervace pupečníkové krve buňky a účinnější, ale metody zůstávají finansovoemkie experimentátoři hodně.

Obecně byly stanoveny kritéria pro odhad počtu hematopoetických buněk a požadavky na studii vzorků pupočníkové krve za účelem identifikace infekčních agens. Aby se zajistila transplantace krvetvorných buněk krvetvorby, musí být všechny vzorky krve vyšetřeny především pro hematogenní infekce a genetické choroby. Někteří autoři doporučují další speciální metody studia pupečníkové krve za účelem diagnostiky genetických chorob, jako thalassemia a srpkovitá anémie, adenosin deaminázy deficitu, agamaglobulinémií Bruton, onemocnění Harlera a sázkaře.

Podle doporučení Ticheli L. Et al (1998), v každém vzorku pupečníkové krve, je nutné určit počet jaderných buněk, SB34-pozitivních buněk a CFU-GM, nést HLA-psaní pro určení krevní skupinou ABO a Rh jeho členství. Kromě toho, očkování se provádí bakteriologické, sérologické testy na HIV a infekce CMV, HBsAg, hepatitidy C, HTLY-I a HTLV-II (T-buněčné leukemické, člověk), syfilis, toxoplazmózy. Polymerázová řetězová reakce na infekci cytomegaloviru a HIV je povinná.

Samotný postup pro získání pupočníkové krve by měl být prováděn v souladu se zásadami lékařské bioetiky. Před zahájením odběru krve je nutné získat souhlas těhotné ženy k jejímu provedení. Předběžný rozhovor s těhotnou ženou k získání informovaného souhlasu k provedení veškeré manipulace, protože krev exfusion plnění a dokončování dokumentů se provádí pouze zdravotnickými pracovníky. V každém případě nepřípustný vykonávajícím těchto postupů pracovníky s biologickou, chemický, farmaceutický a jiné nelékařské vzdělávání, s ohledem na porušení stanovených norem bioethics a lidských práv. Pro pozitivní zkouška na nosné HBsAg, protilátky proti původce hepatitidy C, HIV a syfilis pupečníkové krve neberou a odebrané vzorky krve je již odstraněn a zničen. Je třeba poznamenat, že přeprava latentních infekcí u novorozenců je mnohem vzácnější než u dospělých, a proto pravděpodobnost hematogenní přenosu a rozvoje infekčních komplikací krvetvorných infuzích pupečníkové krve buněk je výrazně nižší než v případě transplantace kostní dřeně od dospělých dárců.

Důležitým bodem aplikace pupečníkové krve na klinice je zhodnocení štěpu, který je založen na kvantifikaci krvetvorných buněk ve vzorku pupečníkové krve buněk a v dávkách potřebných pro transplantaci. Normy pro optimální počet buněk pupečníkové krve vyžadované pro transplantaci dosud nebyly vyvinuty. Neexistuje obecně přijatelné hledisko ani na takových rutinních parametrech jako je počet CD34-pozitivních buněk a CFU-GM. Někteří autoři hodnotí potenciál hematopoetických buněk analýzou dlouhodobých kulturách se stanovení obsahu jednotek pro tvorbu kolonií, které jsou společné granulocyty, erytrocyty, monocyty a megakaryocyty - CFU-GEMM.

V klinických podmínkách však standardní hodnocení transplantace krevní krve obvykle zahrnuje pouze stanovení počtu jaderných nebo mononukleárních buněk.

Skladování hematopoetických kmenových buněk pupečníkové krve

Některé problémy existují v technologii ukládání krvetvorných buněk krvetvorby. Když kryokonzervace krvetvorných kmenových buněk, aby se dosáhlo optimálního režimu zmrazení musí minimalizovat množství pupečníkové krve a červenými krvinkami dříve odstraněna, aby se zabránilo hemolýze a riziko neslučitelnosti reakce antigenům erytrocytů (ABO, Rh). Pro tyto účely jsou vhodné různé metody pro izolaci nukleovaných buněk. Na počátku 90. Let minulého století nejrozšířenější způsob separace jaderných buněk v gradientu hustoty Ficoll na bázi s hustotou 1,077 g / ml, nebo perkolací s hustotou 1,080 g / ml. Separace pupečníkové krve hustotním gradientu umožňuje zvolit převážně mononukleární buňky, ale vede ke značným ztrátám krvetvorných progenitorových buněk, - až do 30-50%.

Účinnost sedimentace hydroxyethylškrobu v procesu izolace buněk z pupečníkové krve se odhaduje různými způsoby. Někteří autoři naznačují nízkou kvalitu oddělení pomocí této metody, zatímco jiní výzkumníci naopak mezi všemi možnými metodami dávají přednost přidělení HSC pupočníkové krve přesně za použití 6% roztoku hydroxyethylškrobu. To upozorňuje na vysokou účinnost sedimentace hemopoetických buněk, která podle některých údajů dosahuje z 84% na 90%.

Zastáncové jiného hlediska si, že téměř všechny procesy frakcionace zahrnovat velké ztráty yadrosoderzhashih buněk a nabídnout, aby oddělení odstředěním, oddělením krev šňůry na 3 frakce: erytrocytů, leukocytů a plazmy v kruhu. Oddělování buněk tímto způsobem, vynálezci zjistili, že obsah mononukleárních buněk časných hematopoietických progenitorových buněk a buněk s CD34 + imunofenotypu nakonec byl v tomto pořadí 90, 88 a 100% původní úrovně. Podobné množství čištěného růstu v tomto způsobu pupečníkových krevních buněk, získaných jinými výzkumníky: Po sedimentaci nukleované přiděleno 92%, 98% - mononukleární, 96% - CD34-pozitivní buňky, a 106% jednotek tvořících kolonie.

V pozdních devadesátých letech byla želatina široce používána jako sedimentační činidlo. V klinické praxi, s použitím želatiny krvetvorné kmenové buňky izolované z pupečníkové krve již od roku 1994. Při použití 3% roztoku želatiny dosahuje účinnost izolace nukleovaných buněk 88-94%. Široké použití želatiny ve vytváření pupečníkové krve banky potvrzuje své výhody oproti jiným způsobem sedimentu. Srovnávací analýza všech výše uvedených způsobů izolace jaderných buněk z hlediska jejich následné použití v každém ze vzorků testu pupečníkové krve ukázaly, že optimální mononukleární buňky sedimenter-out s fenotypem CD34 + / CD45 +, jakož i počet CFU-GM a CFU-GEMM je 3% roztoku želatiny. Ukázalo se, že podstatně méně účinné metody za použití gradientu Ficoll hustoty, a použití methylcelulózy a hydroxyethylškrob, ve kterém hematopoetických ztráta buněk dosáhl 60%.

Rozšíření objemu transplantace kmenových buněk krevních buněk je spojeno nejen s vývojem metod jejich produkce, ale také s ukládáním. Existuje mnoho problémů přímo souvisejících s přípravou pupečníkové krve pro dlouhodobé uchovávání a volbou optimální kryoprezervační techniky pro její vzorky. Patří mezi ně otázky účelnosti provádění separačních postupů, použití různých kryoprezervačních médií a použití metod pro přípravu rozmražených buněk pro transplantaci. Přeprava původních vzorků pupočníkové krve se často provádí z oblastí vzdálených od hematologických center. V souvislosti s tím vzniká potíže s přípustnou dobou uchovávání pupočníkové krve od okamžiku jejího příjmu až po začátek kryokonzervace, což je obzvláště důležité při vývoji buněk z pupečníkové krve.

Studie funkční aktivity krvetvorných pupečníkové krve buněk po dlouhodobém skladování (do 12 let) v kapalném dusíku bylo zjištěno, že asi 95% z krvetvorných buněk během této doby neztrácejí svou vysokou proliferační kapacitu. Papír Yurasova S. Et al (1997) ukázaly, že pupečníkové krve skladovat při pokojové teplotě (22 ° C) nebo při teplotě 4 ° C po dobu 24 a 48 hodin podstatně nesnižuje životaschopnost hematopoetických buněk, že počáteční koncentrace je s výhodou 92 a 88%. Avšak pokud je doba uchovávání prodloužena na tři dny, počet životaschopných nukleovaných buněk v pupočníkové krvi je výrazně snížen. Ve stejné době, další studie zjistila, že v průběhu skladování po dobu 2-3 dnů při teplotě 22 ° C nebo 4 ovlivněna především životaschopnost zralých granulocytů, ale ne krvetvorné buňky.

Na životaschopnost pupečníkové krve krvetvorných kmenových buněk, může mít negativní dopad komponent systému na své sbírky. Analýza účinku různých antikoagulanty, které akční mechanismus je vzhledem k vázání iontů vápníku (ACD, EDTA, XAPD-1) na hematopoetických progenitorových buněk v podmínkách pupečníkové krve uchovávání 24 až 72 hodin ukázalo jejich negativní vliv na životaschopnost jaderných buněk. V této souvislosti, autoři doporučují použití PBS (fosfátový pufr roztok) s přídavkem nativního heparinu bez konzervační látky v koncentraci 20 U / ml, které podle jejich názoru, umožňuje zvýšit dobu skladování nefrakcionovaného pupečníkové krve do 72 hodin a uloží funkční aktivitu kolonie tvořících jednotek. Nicméně, ve studii o zachování CFU-GM a CFU-G ukazují, že pupeční dobu skladování pupečníkové krve před kryokonzervace nepřesáhla devět hodin. Je zřejmé, že v tomto případě by měla působit zásadu, že v případě, že je v rozporu, údaje by měly používat minimální doporučené trvanlivosti pupečníkové krve a začít programovatelného buněk zmrazení izoluje tak rychle, jak je to možné.

Při zmrazení hematopoetických kmenových buněk pupečníkové krve se jako kryoprotektant obvykle používá 10% roztok DMSO. Navíc k vyjádřenému kryoprotektivnímu účinku má dimethylsulfoxid v této koncentraci přímý cytotoxický účinek, dokonce i za podmínky minimální expozice krvetvorných buněk pupečníkové krve. Pro snížení cytotoxického účinku DMSO se aplikuje nulová teplota expozice, zvýšení rychlosti všech manipulací a opakované promytí po rozmrazení vzorků pupečníku.

Ústav hematologie a transfuziologie Akademie lékařských věd na Ukrajině vede od roku 1995 vědecký směr, jehož cílem je studovat pupočníkovou krev jako alternativní zdroj kmenových hemopoetických buněk. Zejména byly vyvinuty nové technologie pro nízkoteplotní kryoprezervaci hemopoetických buněk nefrakcionované a frakcionované pupečníkové krve. Jako kryoprotektant se používá polyvinylpyrolidon s nízkou molekulovou hmotností. Způsob kryokonzervace nefrakcionované pupočníkové krve je založen na původní technologii předběžné preparace buněk na zmrazení a na technice speciálního ošetření buněčné suspenze bezprostředně před transplantací.

Jedním z nejdůležitějších faktorů ovlivňujících úroveň funkční aktivity kryokonzervovaných hemopoetických kmenových buněk je rychlost ochlazení buněčné suspenze, zejména během krystalizační fáze. Programový přístup k řešení problémů, rychlost a zmrazení času nabízí velkou příležitost k vytvoření jednoduchého a vysoce efektivní metody kryokonzervace, a bez peněz od suspenze ochranném buněk před transplantací.

Stupně okamžitého zmrazení a rozmrazování jsou nejvíce nebezpečné pro životaschopnost buněk během jejich přípravy. Při zmrazení hemopoetických buněk může být značná část z nich zničena v okamžiku přechodu mezibuněčného média z kapaliny na krystalizaci v pevné fázi. Pro snížení podílu buněčné smrti se používají kryoprotektanty, mechanismy účinku a kryoprotektantní účinnost byly dostatečně pokryty ve vědecké literatuře.

Slibný směr optimalizace Techniky kryoprezervaci kostní dřeně a pupečníkové krve buněk je kombinovat ve stejném roztoku s nízkou koncentrací kryoprotektantů s několika různými mechanismy účinku, například působením na intracelulární úrovni DMSO a hydroxyethylškrobu nebo albumin majícího extracelulární obepínající účinek.

Pro kryokonzervace krevních buněk pupečníkové se tradičně používají 20% roztok DMSO, která je trvale mechanicky míchanému v ledové lázni, se pomalu nalije do suspenze buněk, aby se dosáhlo stejné (1: 1) poměr objemu buněčné suspenze a cryoprotectant. Konečná koncentrace dimethylsulfoxidu je 10%. Buněčná suspenze byla ochlazena na programu při rychlosti krioustanovke HS / min na -40 ° C, načež se rychlost chlazení byla zvýšena na 10 ° C / min. Po dosažení -100 ° C se nádoba s buněčnou suspenzí umístí do kapalného dusíku (-196 ° C). Při této metodě kryokonzervace dosahuje bezpečnost funkčně aktivních mononukleárních buněk po rozmrazení 85% původní hodnoty.

Modifikace kryokonzervačních metod jsou zaměřeny na snížení koncentrace DMSO přidáním hydroxyethylškrobu (konečné koncentrace dimethylsulfoxidu a hydroxyethylškrobu jsou 5% a 6%). Vysoká účinnost této spojky je pozorována kryogenního ochranného činidla během zmrazování kaše myeloidních buněk, kde ne méně než ochrana buněk při použití pouze jedné 10% roztoku dimethylsulfoxid. Počet životaschopných nukleovaných buněk dosáhl 96,7% základní úrovně a jejich funkční aktivita, odhadovaná počtem CFU-GM, byla 81,8%.

Při použití dimethylsulfoxidu roztoku při koncentracích v rozmezí od 5 do v kombinaci s 4% hydroxyethylškrob (konečná koncentrace), 10% zjištěno, že zachování CD34-pozitivních buněk v těchto rozmezích dimethylsulfoxid prakticky beze změny. Zároveň se v podmínkách snížení koncentrace DMSO z 5 až 2,5% je pozorovaná hmota je smrt krevních buněk pupečníkové - počet živých buněk jednotek se snižuje z 85,4 na 12,2%. Další autoři také k závěru, že je to 5 až 10% roztok dimethylsulfoxidu (v autorském provedení - v kombinaci s autologní sérum) s maximální účinností zajistit ochrana buněk během kryokonzervace pupečníkové krve HSC. Kromě toho, vysoká bezpečnost postupně zmraženy a rozmraženy buňka je označena v případě kombinace 5 nebo 10% DMSO 4% roztokem hydroxyethylškrobu, a to zejména při řízené rychlosti chlazení TOS / min. V dalším použitého papíru kryoprotekční řešení skládající se ze tří složek již - DMSO, čištěný lidský albumin a RPMI médiem v poměru 1: 4: 5, která byla přidána k buněčné suspenzi až do stejných objemových poměrech (konečná koncentrace DMSO byla 5%). Po rozmrazení ve vodní lázni při teplotě + 4 ° C přesáhla bezpečnost CFU-GM 94%.

Někteří autoři navrhují použití nefrakcionované krevní krve pro kryokonzervaci, protože při odstranění červených krvinek jsou ztraceny významné množství hematopoetických buněk. V tomto provedení se 10% roztok dimethylsulfoxidu používá k ochraně mononukleárních buněk před škodlivým účinkem kryokrystalizace. Mražení se provádí při konstantní rychlosti ochlazování HS / min až -80 ° C, po které se suspenze buněk pupečníkové krve ponoří do kapalného dusíku. Při této metodě zmrazení dochází k částečnému rozpadu erytrocytů, proto krevní vzorky nevyžadují frakcionaci. Po rozmrazení se buněčná suspenze promývá z volného hemoglobinu a dimethylsulfoxidu v roztoku lidského albuminu nebo v autologním séru pacienta a používá se k transplantaci.

Zachování krvetvorných progenitorových buněk po rozmrazení nefrakcionovaný pupečníkové krve je skutečně vyšší než frakcionaci, ale v souvislosti s krioustoychivostyu červených krvinek může způsobit vážné problémy v důsledku post-transfuzní transfúze ABO-nekompatibilní červených krvinek. Kromě toho se výrazně zvyšuje objem uložené nefrakcionované krve. Z klinického hlediska, ještě více s výhodou kryokonzervace dříve izolován a přečištěn od ostatních buněčných frakcí krvetvorných buněk pupečníkové krve.

Zejména způsob je kryokonzervace šňůra krvinek frakcionované umožňuje odstranění erythrocytů v přípravě pro zmrazení, který používá 6% roztoku hydroxyethylškrobu v kompozici plazmozameshchath řešení „Stabizol“. Po rozmrazení je takto získaná buněčná suspenze připravena pro klinické použití bez další manipulace.

V současné době je tedy mnoho účinných způsobů kryoprezervace pupočníkové krve. Zásadní rozdíl mezi nimi je, že nefrakcionovaný vzorky krve zmrazené nebo podrobí separaci na buněčné frakce v přípravné fázi a jaderných buněk sklizených bez příměsí erytrocytů.

Transplantace hemopoetických kmenových buněk pupečníkové krve

Na konci 80. Let - začátkem 90. Let minulého století bylo zjištěno, že pupečníková krev, která dodává plod během těhotenství, je charakterizována vysokým obsahem hematopoetických kmenových buněk. Relativní jednoduchost získávání buněk pupečníkové krve a absence zjevných etických problémů podporují použití kmenových buněk pupočníkové krve v praktické medicíně. První úspěšná transplantace pupočníkové krve dítětem s anemií Fanconi sloužila jako výchozí bod pro rozšíření objemu transplantace kmenových buněk z pupečníkové krve a vytvoření systému pro její poskytování. V globálním systému bank z pupečníkové krve je největším centrem New York pro placentární krev, která je v rozvaze národních institucí zdraví. Počet uložených vzorků krevní krve v této bance se blíží k 20 LLC. Počet příjemců (zejména dětí) roste a úspěšná transplantace byla provedena. Podle ministerstva zdravotnictví Spojených států období bezprostředně po transplantaci příjemců HSC pupočníkové krve již po uplynutí 10 let neexistuje.

To není překvapivé, neboť četné studie hematopoetického potenciálu pupečníkové krve ukázaly, že množství a kvalita z prvních kmenových buněk není jen není horší než u dospělého člověka kostní dřeně, ale i některá opatření jej překročit. Vyšší proliferační potenciál pupečníkové krve kmenových buněk způsoboval vývojové buněčné signalizace funkce, přítomnost receptorů na HSC do konkrétních růstových faktorů, kapacita kabel krvinek autokrinní produkci růstových faktorů, velké velikosti a délky telomer.

Tak, genomické a fenotypové vlastnosti krvetvorných kmenových buněk z pupečníkové krve předurčují kvalita přihojení vysokém potenciálu zotavení dárců hematopoetických u příjemce.

Výhody hematopoetických kmenových buněk pupečníkové krve

Mezi skutečné výhody používání hematopoetických pupečníkové krve kmenových buněk pro transplantaci oproti jiným zdrojům krvetvorných buněk je třeba poznamenat, téměř nulové riziko pro zdraví dárce (pokud není považován za takový placenty), přičemž odpadá nutnost celkové anestezie. Použití pupeční transplantaci pupečníkové krve buněk expanduje částečně HLA-kompatibilní štěpu systému (nekompatibility od jedné do tří antigenů). Technika dlouhodobého skladování krvetvorných kabel krvinek ve zmrazeném stavu, což zvyšuje pravděpodobnost získání vzácné HLA-typu a snižuje čas vyhledávání HLA shodou alogenní transplantaci. Současně je významně sníženo riziko vzniku některých latentních infekcí přenášených přenosovou cestou. Kromě toho existuje levný způsob biologického životního pojištění v souvislosti s možností použití buněk z pupečníkové krve pro autologní transplantaci.

Nicméně, protože malá množství krve, které mohou být získané z placenty (průměr ne větší než 100 ml), do popředí problém, jak získat maximální možné množství krve z pupečníkové žíly přesně v souladu s podmínkami minimální riziko bakteriální kontaminace pupeční odvozených vzorků pupečníkové krve.

Primitivní krvetvorné buňky z pupečníkové krve jsou obecně identifikovány přítomností na svém povrchu glikofosfoproteina CD34, a to na základě jejich funkčních vlastností zkoumáním klonogenní testu nebo kolonie tvorby in vitro. Srovnávací analýza ukázala, že se v pupečníkové krvi a kostní dřeně maximální obsah CD34-pozitivních mononukleárních buňkách ve frakci jsou příslušně 1,6 a 5,0%, maximální úroveň jednotek tvořících kolonii na subpopulaci buněk CD34 + - 80 a 25%, celková účinnost klonování CD34 + -buňky - 88 a 58%, maximální tvořících kolonie buněk s vysokým proliferačním potenciálem (HPP-CFC v -populyatsii CD34 +) - 50, a 6,5%. Je třeba dodat, že účinnost klonování CD34 + CD38-buňkách a schopnost reagovat na stimulaci cytokinové také vyšší v hemopoetických kmenových buněk pupečníkové krve.

Kombinované fenotypové antigeny Thy-1, CD34 a CD45RA potvrzuje vysokou proliferační kapacitu pupečníkové krve hematopoetických buněk a exprese tří antigenů na povrchu krevních buněk pupečníkové naznačuje, že patří do kmenové buňky. Navíc bylo zjištěno, že pupočníková krve obsahuje buňky s fenotypem CD34 +, které nemají lineární diferenciační markery. Úroveň v pupečníkové krvi buněčných subpopulací s fenotypovou profilem CD34 + / Lin je přibližně 1% z celkového počtu CD34-pozitivních buněk. Hematopoietické progenitorové buňky vedou k pupečníkové krvi jako lymfoidních buněčných linií, a množství lineárního pluripotentních myeloidní diferenciace buněk, což rovněž naznačuje, že patří do kmenových buněk.

Jak již bylo zmíněno, podstatné rozdíly mezi kostní dřeně a pupočníkovou krví jsou množství hematopoetických buněk používaných k transplantaci, získaných jedním postupem. Při kostní dřeně ztráta transplantátu z buněčné hmoty v separačním procesu, kryokonzervace, rozmrazování a zkoušení jsou přípustné v rozmezí 40-50%, šňůra krevní buňky, jako jsou ztráta je velmi významný, protože při použití nedostatečný počet transplantace HSC mohou být neudržitelný. Podle G. Kogler et al (1998), pro transplantaci buněk v příjemce tělesné hmotnosti 10 kg potenciálu po transplantaci (celkový počet odebraných vzorků pupečníkové krve - 2098), mohou být všechny vzorky pupečníkové krve, tělesná hmotnost 35 kg - 67%, a to pouze 25% vzorků bude schopno zajistit účinnou transplantaci u pacientů s tělesnou hmotností 50-70 kg. Tato klinická situace naznačuje potřebu optimalizovat a zlepšit účinnost stávajících metod odběru vzorků, reprodukce a skladování buněk pupečníkové krve. Z tohoto důvodu, otázky standardizace metod odběru vzorků, testování, separace a kryokonzervaci pupečníkové krve je nyní široce popsány v literatuře pro vytvoření krevních bank, jeho použití v klinické praxi, stejně jako se stanoví podmínky a podmínky skladování krvetvorných kmenových buněk z pupečníkové krve.

[7], [8], [9],

Použití hematopoetických kmenových buněk pupečníkové krve v medicíně

Obvykle je možno izolovat až 10 ⁶ hematopoetických kmenových buněk z pupečníkové krve , zřídka více. Proto se až do dnešního dne zůstává otevřenou otázkou ohledně přiměřenosti výše pupečníkové krve krvetvorných buněk obnovit hematopoeza příjemce pro dospělé. Názory na tuto otázku byly rozděleny. Někteří výzkumní pracovníci se domnívají, že toto množství je dostatečné k transplantaci děti, ale příliš malá k transplantaci dospělého člověka, pro které je podávání optimální (7-10) x 10 ⁶ CD34-pozitivních buněk na 1 kg tělesné hmotnosti - průměrně 7 x 10 ⁸ na transplantaci. Z těchto výpočtů vyplývá, že jeden vzorek pupočního pupečníku obsahuje 700 krát méně hematopoetických kmenových buněk, než je potřebná pro jednu transplantaci u dospělého pacienta. Nicméně, jako kvantitativní vyhodnocení se provádí obdobně s počtem buněk kostní dřeně po transfuzi a zcela ignoruje vývojové charakteristiky krvetvorby.

Zejména se ignoruje skutečnost, vyšší proliferační kapacitu krvetvorných kmenových buněk z pupečníkové krve ve srovnání s krvetvorných progenitorových buněk kostní dřeně. Nálezy u kolonií tvořící potenciálu in vitro naznačují, že jedna dávka může poskytnout pupečníkové krve hematopoetických rekonstituci dospělého příjemce. Na druhé straně, neměli bychom zapomínat, že počet HSC klesá i v procesu embryonálního vývoje: obsah CD34-pozitivních buněk v pupečníkové krve se lineárně snižuje 5x po dobu 20 týdnů (krve pro studii byla získána v případě předčasného ukončení těhotenství), do 40 týdnů těhotenství (období fyziologických porodů), které je doprovázeno paralelním, trvalým zvyšováním exprese lineárních značek cytodiferenciace.

Vzhledem k nedostatku standardizovaného přístupu k kvantifikace v pupečníkové krevních vzorcích progenitorových buněk spor optimální dávce krvetvorných kmenových buněk z pupečníkové krve pokračuje. Někteří vědci se domnívají, že za výběr kritérií vzorků pupečníkové krve je možné použít počet jaderných buněk a mononukleárními buňkami, přepočítat na tělesné hmotnosti příjemce, to znamená, že jejich dávku. Někteří autoři se domnívají, že minimální hranice kvantifikace CD34 + buněk i pro autotransplantace GCW je 2 x 10 ⁶ / kg. Zvýšení dávky hematopoetických buněk na 5 x 10 ⁶ buněk / kg (celkem 2,5) již poskytuje vhodnější pro raném období po transplantaci, snižuje výskyt infekčních komplikací a zkracuje dobu preventivní antibiotické terapie.

Podle E. Gluckman et al (1998) v hematologii pro úspěšnou transplantaci krevních buněk z pupečníkové je zavedení alespoň 3,7 x 10 ⁷ jaderných buněk na 1 kg tělesné hmotnosti příjemce. Při poklesu dávky hematopoetických kmenových buněk na 1 x 10 ⁷ a méně nukleovaných buněk na 1 kg tělesné hmotnosti je riziko zhoršení štěpu a recidivy rakoviny prudce zvýšeno. Je třeba poznamenat, že minimální počet progenitorových buněk potřebných pro rychlou obnovu hemopoézy po transplantaci GSG dosud není znám. Teoreticky může být dosaženo pomocí jediné buňky, ale v klinické Transplantace kostní dřeně rychlé a stabilní přihojení zaručené transfuzi alespoň (1-3) x 10 ⁸ jaderných buněk na 1 kg tělesné hmotnosti pacienta.

Nedávná podrobná studie určující optimální množství HSC v onkohematologii zahrnovala pozorování pacientů ze tří skupin izolovaných v závislosti na obsahu CD34-pozitivních buněk v transplantačním materiálu. Pacientům byl podáván první skupiny (3-5) x 10 ⁶ buněk / kg. GSK dávka u pacientů druhé skupiny činila (5-10) x 10 ⁶ buněk / kg a třetí skupině pacientů transplantovaných více než 10 x 10 ⁶ buněk CD34 + / kg. Nejlepší výsledky byly pozorovány u skupiny příjemců léčených počtu štěpu CD34-pozitivní buňky byly rovná (3-5) x 10 ⁶ / kg. Se zvyšující se dávky transplantovaných buněk než 5 x 10 ⁶ / kg, byly zjištěny statisticky významné výhody. Tak velmi velké HSC obsah v transplantaci (> 10 x x 10 ⁶ / kg) byl spojen s významným množstvím zbytkového reinfúzi nádorových buněk, což vede k relapsu onemocnění. Mezi počtem transplantovaných alogenních progenitorových buněk a vývojem reakce "štěp versus hostitel" nebyla přímá souvislost.

Kumulovaná celosvětová zkušenost s transplantací HSC pupočníkové krve potvrzuje jejich vysoký potenciál obnovy. Rychlost štěpení transplantace pupečníkové krve koreluje s počtem zavedených nukleovaných buněk. Nejlepší výsledky jsou zaznamenány při transplantaci 3 × 10 ⁷ / kg, zatímco u kostní dřeně je tato dávka 2 × 10 ⁸ / kg. Podle údajů koordinačních center se na konci roku 2000 uskutečnilo 1200 transplantací buněk pupečníkové krve na světě, a to především z dárcovských příbuzných (83%). Je zřejmé, že pupečníková krev by měla být považována za alternativu kostní dřeně k transplantaci u pacientů s hemoblastózou.

Nicméně, neonatální povaha Cordova zdrojem krvetvorné tkáně podporovat v důsledku přítomnosti funkčních vlastností jeho GCW. Avšak pouze klinické zkušenosti může dát odpověď na otázku adekvátnosti vzorku pupečníkové krve pro dospělé krvetvorné rozpuštění příjemce s aplazií krvetvorby. Transplantace krevních buněk pupečníkové se používá při léčbě mnoha onemocnění nádoru a non-nádorové povahy: leukémií a myelodysplastických syndromů, non-Hodgkinova lymfomu, a neuroblastomu, aplastické anémie, kongenitální Fanconiho anémie a Diamond Black ventilátor, deficitem adheze leukocytů, Barr syndrom, Gunther onemocnění Harlera syndrom, talasemie ,

Pozornost si zaslouží a samostatné studii imunologických aspektů transplantace hematopoetických pupeční šňůry krevní buňky. Je ukázáno, že v případě, že transplantaci pupečníkové krve kmenových buněk od dárců s neúplnými výsledky po transplantaci HLA shodou jsou zcela uspokojivé, že, podle autorů, což ukazuje na nižší imunoreaktivita pupečníkové krve, než kostní dřeni.

Detailní studium buněčné složení pupečníkové krve ukázal rysy jak fenotypové spektrum efektorových buněk imunitního systému a jejich funkční aktivitu, což umožňuje považovat pupečníkové krve jako zdroj HSC s relativně nízkým rizikem reakce „štěp versus hostitel“. Další vlastnosti funkční nezralost krvinky imunokompetentní kabelu je třeba poznamenat, nerovnováha produkce cytokinů a snížení citlivosti na cytokiny nové regulace imunitní odpovědi. Vznikající v důsledku inhibice aktivity cytotoxických lymfocytů je považován za faktor přispívající k vytvoření imunologické tolerance k transplantované krvetvorné tkáně. V populaci pupečníkové krve lymfocytů, na rozdíl od periferní krve a kostní dřeně od dospělých dárců, dominuje neaktivní, nezralé buňky a supresorové buňky. To naznačuje sníženou dostupnost T-lymfocytů z pupočníkové krve na imunitní odpověď. Důležitým rysem monocytové populace buněk pupečníkové krve je nízký obsah funkčně úplných a aktivních antigen prezentujících buněk.

Na jedné straně, nízký stupeň zralosti efektorových buněk imunitního systému v krevních hodnot pupečníkové vztahuje na jeho použití v klinické praxi, protože tyto funkce umožňují snížení intenzity imunitního konfliktu mezi dárcem a příjemcem buněk. Ale na druhé straně, víme o existenci korelace mezi mírou reakce „reakce štěpu proti hostiteli“ a transplantaci protinádorový účinek, tj, vlivem vývoje „reakce štěpu proti leukémii“. V souvislosti s tím byla provedena studie protinádorové cytotoxicity buněk pupečníkové krve. Výsledky ukazují, že navzdory skutečnosti oslabené imunitní odpovědi pupečníkové krve buněk na stimulaci antigenem, aktivovaných v první řadě jsou NK buňky a killeropodobnymi buňky, které se aktivně podílejí na mechanismech provádění protinádorové cytotoxicity. Kromě toho, v subpopulaci lymfocytů pupečníkové krve byly nalezeny s fenotypem CD16 + CD56 + a CD16 „TCRa / p +. Předpokládá se, že tyto buňky jsou v aktivované formě provádění reakce“ štěp leukémie“.

Na Ústavu onkologie Akademie lékařských věd Ukrajině byly podávány kryokonzervované krvetvorné buňky z pupečníkové krve u pacientů s rakovinou s přetrvávajícím hypoplazie krvetvorby v důsledku chemoterapie a radioterapie. U těchto pacientů po transplantaci hematopoetických kmenových buněk z pupečníkové krve účinně obnovit krevní útlaku, o čemž svědčí přetrvávající elevací zralých vytvořených prvků v periferní krvi, stejně jako zvýšení ukazatele charakterizující stav buněčné a humorální imunity. Stabilita repopulyatsionnogo účinku po transplantaci krvetvorných buněk pupečníkové krve umožňuje trvalé záření a chemoterapie, bez přerušení léčby. Existují důkazy o vyšší účinnosti alotransplantátu pacientů s rakovinou, kmenové buňky pupečníkové krve: roční riziko recidivy nádoru při jejich použití bylo 25% oproti 40% u pacientů s transplantovanými genu alogenní kostní dřeně.

Mechanismus účinku kryokonzervovaných pupečníkové krve kmenových buněk by mělo být považováno za výsledek humorální stimulace příjemců hematopoezy způsobených jedinečné schopnosti neonatálních buněk autokrinní produkci hematopoetických růstových faktorů, jakož i v důsledku dočasné štěpu dárcovských buněk (jako potvrzení - významné zvýšení obsahu periferní krvi příjemce fetálního hemoglobinu 7-15 tý den po transfuzi, ve srovnání s výchozí hodnotou). Nepřítomnost u příjemců pupečníkové krve po transfuzi reakcí - výsledek jeho relativní tolerance imunitních buněk, stejně jako kritérium spolehlivosti užitečnosti kryokonzervované biologického materiálu.

Progenitorové buňky T lymfocytů vrah pupečníkové krve schopné aktivace pod vlivem stimulace exogenní cytokinů, který je použit k vytvoření nových ex vivo a in vivo metody indukce protinádorové cytotoxické lymfoidní buňky pro následnou transplantaci imunoterapii. Kromě toho, „nezralost“ genomu pupečníkové krve imunitních buněk umožňuje jejich použití pro zvýšení protinádorové aktivity molekulárním modelováním.

Dnes je šňůra z pupečníkové lázně široce používána především v pediatrické hematologii. U dětí s akutní leukémií alotransplantaci krvetvorných kmenových buněk z pupečníkové krve ve srovnání s allo-štěpů kostní dřeně, což výrazně snižuje výskyt reakce „štěp versus hostitel“. Nicméně je třeba poznamenat, po dlouhou dobu neutropenie a trombocytopenie, a bohužel, vyšší úroveň 100 denní úmrtnosti po transplantaci. Delší doba zotavení v periferní krvi granulocytů a krevních destiček může být z důvodu nedostatečné odlišení jednotlivých subpopulací CD34 pozitivních buněk pupečníkové krve, o čemž svědčí nízká úroveň absorpce radioaktivního rhodamin a nízkou expresí CD38 antigenů na jejich povrchu.

Ve stejné době, transplantace hematopoetických kmenových buněk z pupečníkové krve dospělých pacientů, který probíhá vzhledem k nedostatku jak kompatibilního nepříbuzného dárce kostní dřeně, stejně jako možnosti mobilizovat autologní HSC vykazoval vysokou roční přežití bez relapsu u pacientů ve věku do 30 let (73%) , Rozšíření příjemce věkové rozpětí (18-46 let) se snížil přežití na 53%.

Kvantitativní analýza buněk s fenotypem CD34 + kostní dřeně a pupečníkové krve vykazovaly vyšší (3,5 krát) jejich obsahu v kostní dřeni, ale pupečníkové krve ukázaly významné převahu buněk s fenotypové profilem CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi markerů CD34 + a HLA-DR proliferují aktivnější než buňky s imunocytologie CD34 + a HLA-DR +, jak bylo potvrzeno v experimentálních studiích růstu dlouhodobé kultivaci hematopoetických buněk in vitro. Primitivní buněčné progenitory s fenotypem CD34 + CD38 obsažené v pupečníkové krvi a kostní dřeně, ale pupečníkové krve buňky s markerem stanovené CD34 + CD38 mají vyšší aktivitu než klonogenní krvetvorných buněk stejného fenotypu, izolované z dospělých dárce kostní dřeně. Kromě toho se pupečníkové krve buňky s CD34 + CD38 imunofenotypu proliferují v reakci na stimulaci s cytokiny (IL-3, IL-6, G-CSF) a reprodukovat 7 krát více kolonií v dlouhodobých kulturách než buňky kostní dřeně.

Banky kmenových buněk z pupočníkové krve

Pro správný vývoj nového oboru praktického lékařství - transplantace pupečníkové krve kmenových buněk, jakož i provádět transplantace krvetvorných kmenových buněk kostní dřeně, je třeba mít rozsáhlou síť krevních bank, které jsou již zavedené v USA a Evropě. Vnitrostátní sítě bank z pupečníkové banky jsou sdruženy Asociací bank Netcord Banks. Proveditelnost vytvoření mezinárodní sdružení banky pupečníkové krve je dána skutečností, že k provedení nesouvisející transplantace potřebují velké množství vzorků pupečníkové krve napsaný, což umožňuje zvolit HLA identický dárce. Pouze zřízení banky s úložným systémem, ve kterém krevní vzorky různých HLA typy mohou ve skutečnosti vyřešit problém najít potřebnou dárce. Organizace takového systému pupečníkové krve banky vyžadují předběžnou vývoj etických a právních norem, které v současné době nadále bude jednat na mezinárodní úrovni.

Chcete-li vytvořit ubrusové krevní banky na Ukrajině, je nutné vypracovat řadu ustanovení a dokumentů.

Především jde o otázky standardizace metod odběru vzorků, frakcionace a zmrazení pupečníkové krve. Je nutné regulovat pupeční pravidla pro odběr pupečníkové krve v nemocnicích, v souladu s požadavky lékařské etiky, ke stanovení minimálního množství pupečníkové krve, který poskytuje úspěšnou transplantaci. To by mělo být porovnány a standardizaci různých kritérií hodnocení kvality a počet hematopoetických progenitorových buněk, stejně jako způsoby HLA typizace a metody diagnostiky genetických a infekčních nemocí, které mohou být přenášeny pomocí infuzí krevních buněk z pupečníkové nastavit obecná kritéria pro výběr zdravých dárců. Je také třeba diskutovat o vytvoření samostatných skladovacích zařízení pro sérum, buňky a DNA odvozené z pupočníkové krve.

Je naprosto nezbytné zorganizovat počítačovou síť dat o pupočníkové krvi pro provádění vztahu s registry dárců kostní dřeně. Pro další vývoj buněčné transplantace by měly být vyvinuty speciální protokoly pro porovnání výsledků transplantace pupočníkové krve a kostní dřeně z příbuzných příbuzných HLA a nespojených dárců. Při jednání s etickými a právními problémy klinické využití pupečníkové krve buňky mohou pomoci standardizovat dokumentaci, včetně informovaného souhlasu rodičů, jakož i oznámení o matku nebo příbuzným dítěte identifikovaného genetické a / nebo infekčních nemocí.

Rozhodující podmínkou pro rozvoj transplantace buněk na Ukrajině bude přijetí Národního programu pro dárcovství kmenových buněk a rozvoj mezinárodní spolupráce s ostatními zeměmi v rámci Světové asociace dárců kostní dřeně (WMDA), Národního programu amerického dárce kostní dřeně (NMDP) a dalších registrů.

Zevšeobecňovat ještě krátkou historii transplantací krvetvorných buněk z pupečníkové krve, bereme na vědomí, že první předpoklad o možnosti klinické aplikace pupečníkové krve, vyrobený na počátku 70. Let, byly potvrzeny v 80. Letech výsledky experimentálních studií na zvířatech, a v roce 1988 rok byl proveden jako první na světě transplantaci krvetvorných buněk lidské pupečníkové krve, a pak se začala rozvíjet globální síť banky pupečníkové krve. Po 10 letech se počet pacientů s transplantovanými krvetvorných buněk, pupečníkové krve blíže k 800. Mezi nimi byli pacienti s různými nádorových onemocnění (leukémie, lymfomu, pevné nádory) a nenádorových (kongenitální imunodeficience, anémie, onemocnění spojená s metabolickými poruchami) povahy.

U pupočníkové krve je obsah časných a oddaných buněčných progenitorů vyšší než v periferní krvi dospělého. Podle počtu jednotek pro tvorbu kolonií granulocytů a makrofágů a jejich proliferativní potenciál pupečníkové krve, je mnohem větší, než periferní krvi dospělých, a to i po podávání růstových faktorů. V dlouhodobém horizontu in vitro buněčných kultur označených velkou proliferační aktivitu a životaschopnost pupečníkové krve buněk než buněk kostní dřeně. Kritické momenty v transplantaci pupečníkové krve kmenových buněk jsou hematopoetické potenciální počet a buňky s jádry, přítomnost cytomegalovirové infekce, HLA-kompatibilní dárce a příjemce, tělesné hmotnosti a věku pacienta.

Nicméně transplantace kmenové krve by se měla považovat za alternativu k transplantaci kostní dřeně za účelem léčby těžkých krevních onemocnění, zejména u dětí. Klinické problémy transplantací krevních buněk z pupečníkové postupně vyřešen - jsou již poměrně účinné odebírání vzorků, separace a kryokonzervace pupečníkové krve buňky, za předpokladu, že podmínky pro vznik banky pupečníkové krve, testovacích metod zlepší jaderných buněk. Optimální separace během rozsáhlých předlisek pupečníkové krve hematopoetických kmenových buněk v zařízení bank by měla být považována za 3% roztoku želatiny a 6% roztokem hydroxyethylškrobu.

Perehrestenko P. Et al (2001) správně poukazují na to, že transplantace pupečníkové krve kmenových buněk by mělo své místo v komplexu terapeutických opatření k překonání depresi krvetvorby různého původu, jako GSK pupečníkové krve se liší v řadě významných výhod, mezi nimiž důležité je relativní snadnost sklizně, neexistuje žádné riziko pro dárce, nízká kontaminace neonatálních buněk viry a relativně nízké náklady na transplantaci. Někteří autoři uvádějí, že transplantace pupečníkové krve buňky méně často než buněk kostní dřeně je doprovázen komplikací spojených s reakcí „štěp versus hostitel“, který je v důsledku, podle jejich názoru, slabá exprese v pupečníkové krve buněk HLA-DR antigenů a jejich nezralost. Nicméně, hlavní populace jaderných buněk z pupečníkové krve jsou T-lymfocyty (SDZ-pozitivních buněk), jejichž obsah je asi 50%, což je o 20% méně než v periferní krvi dospělého člověka, ale fenotypové rozdíly subpopulací T-buněk od nich zdroje jsou zanedbatelné.

Mezi faktory, které přímo ovlivňují přežití transplantace kmenových buněk z pupečníkové krve, měli bychom poznamenat, věk pacientů (nejlepší výsledky jsou vidět u příjemců ve věku do 5 let), včasnou diagnózu onemocnění a formu leukémie (účinnost je výrazně vyšší u akutní leukémie). Velmi důležitá je dávka nukleovaných buněk pupečníkové krve, stejně jako jejich kompatibilita s HLA s příjemcem. Je žádná analýza nehoda klinické účinnosti transplantace pupečníkové krve GSK v onkologii a hematologii ukazuje nejlepší výsledky léčby pomocí souvisejících sazenic jednoroční přežívání bez onemocnění v tomto případě dosahuje 63%, zatímco nepříbuzné transplantaci - pouze 29%.

To znamená, že přítomnost velkého počtu kmenových buněk v pupečníkové krvi a vysoké repopulyatsionnaya výkonnostních neonatálních krvetvorných kmenových buněk, aby byly vhodné pro alogenní transplantaci u pacientů s hematologickými malignitami. Uvědomte si však, že rekapitulace krvetvorby po transplantaci hematopoetických kmenových buněk z pupečníkové krve „se protáhl v čase“: obnovení obsah neutrofilů periferní krve se obvykle vyskytuje na konci 6. Týdne, a trombocytopenie jev zmizí, obvykle po 6 měsících. Kromě toho, nezralé krvetvorné buňky pupečníkové krve nevylučuje imunologický konflikt: těžký průběh akutní a chronické reakce „štěp versus hostitel“, pozorované v tomto pořadí v 23 a 25% příjemců. Relapsy akutní leukémie na konci prvního roku po transplantaci buněk pupečníkové krve jsou zaznamenány v 26% případů.

[10], [11]