Lékařský expert článku
Nové publikace
Analýza polymorfismu délky restrikčních fragmentů
Naposledy posuzováno: 05.07.2025
Veškerý obsah iLive je lékařsky zkontrolován nebo zkontrolován, aby byla zajištěna co největší věcná přesnost.
Máme přísné pokyny pro získávání zdrojů a pouze odkaz na seriózní mediální stránky, akademické výzkumné instituce a, kdykoli je to možné, i klinicky ověřené studie. Všimněte si, že čísla v závorkách ([1], [2] atd.) Jsou odkazy na tyto studie, na které lze kliknout.
Pokud máte pocit, že některý z našich obsahů je nepřesný, neaktuální nebo jinak sporný, vyberte jej a stiskněte klávesu Ctrl + Enter.
Rozšířené používání různých restrikčních endonukleáz pro analýzu chromozomální DNA odhalilo obrovskou variabilitu lidského genomu. I malé změny v kódujících a regulačních oblastech strukturních genů mohou vést k zastavení syntézy určitého proteinu nebo ke ztrátě jeho funkce v lidském těle, což obvykle ovlivňuje fenotyp pacienta. Lidský genom však z přibližně 90 % tvoří nekódující sekvence, které jsou variabilnější a obsahují mnoho tzv. neutrálních mutací neboli polymorfismů a nemají fenotypovou expresi. Takové polymorfní oblasti (lokusy) se používají v diagnostice dědičných onemocnění jako genetické markery. Polymorfní lokusy jsou přítomny ve všech chromozomech a jsou vázány na specifickou oblast genu. Stanovením lokalizace polymorfního lokusu je možné zjistit, který gen je asociován s mutací, která u pacienta způsobila onemocnění.
K izolaci polymorfních oblastí DNA se používají bakteriální enzymy - restriktázy, jejichž produktem jsou restrikční místa. Spontánní mutace, které se vyskytují v polymorfních místech, je činí rezistentními, nebo naopak citlivými na působení specifické restriktázy.
Mutační variabilitu v restrikčních místech lze detekovat změnou délky restrikčních fragmentů DNA jejich separací pomocí elektroforézy a následnou hybridizací se specifickými DNA sondami. V nepřítomnosti restrikčního místa v polymorfním místě bude na elektroforegramech detekován jeden velký fragment a v jeho přítomnosti bude přítomen menší fragment. Přítomnost nebo nepřítomnost restrikčního místa v identických lokusech homologních chromozomů umožňuje poměrně spolehlivé značení mutantního a normálního genu a sledování jeho přenosu na potomky. Při studiu DNA pacientů, v obou chromozomech, u kterých je restrikční místo přítomno v polymorfní oblasti, budou tedy na elektroforegramu detekovány krátké fragmenty DNA. U pacientů homozygotních pro mutaci, která mění polymorfní restrikční místo, budou detekovány delší fragmenty a u heterozygotních pacientů krátké i dlouhé fragmenty.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]