Původce tularémie

Tularemie je primární onemocnění zvířat (hlodavců), u lidí probíhá jako akutní infekční onemocnění s pestrým klinickým obrazem a pomalým zotavením. Původce tularemie - Francisella tularensis - byl objeven G. McCoyem a S. Chapinem v roce 1912 během epizootie u syselů v oblasti s jezerem Tulare (Kalifornie), podrobně studoval E. Francis, na jehož počest je rod pojmenován.

Jedná se o velmi malé, 0,2-0,7 µm velké, kokovité nebo elipsoidní polymorfní tyčinky, které při použití speciálních barvicích metod velmi často dávají bipolární barvu; jsou nepohyblivé, gramnegativní, netvoří spory; kataláza negativní, tvoří H2S, striktní aeroby, teplotní optimum pro růst je 37 °C, pH 6,7-7,2. Virulentní kmeny mají kapsli, tvoří kyselinu bez plynu při fermentaci některých sacharidů (glukóza, maltóza, manóza, fruktóza, dextrin), stupeň fermentace se u jednotlivých kmenů liší, obsah G+C v DNA je 33-36 mol %. F. tularensis neroste na běžných médiích. G. McCoy a Sh. Chapin použili koagulované žloutkové médium. Na něm bacil tularemie roste ve formě jemných malých kolonií připomínajících kapky rosy, poté kultura získává charakter jemného shagreenového povlaku se slabě vyjádřenou hlenovitou konzistencí. E. Francis navrhl pro pěstování tularemiového bacilu živný agar, obsahující 0,05-0,1 % cystinu, 1 % glukózy a 5-10 % krve. Na takovém médiu je růst bujnější a drsnější: kolonie jsou kulaté s hladkým povrchem, mléčné barvy, vlhké, s hlenovitou konzistencí, obklopené charakteristickým zeleným kruhem. Růst je pomalý, kolonie dosahují maximální velikosti 3.-5. den (1 - 4 mm). Bakterie tularemie se dobře množí v žloutkovém vaku kuřecího embrya a způsobují jeho úhyn 3.-4. den.

Pro růst F. tularensis jsou nezbytné následující aminokyseliny: arginin, leucin, isoleucin, lysin, methionin, prolin, threonin, histidin, valin, cystin, u některých poddruhů serin, tyrosin, kyselina asparagová; kromě toho pro růst potřebují také kyselinu pantothenovou, thiamin a ionty Mg2. S ohledem na tyto vlastnosti lze pro kultivaci F. tularensis použít syntetická média.

Rod Francisella patří do třídy Gammaproteobacteria, kmene Proteobacteria. Tento rod zahrnuje také F. novicida, jejíž patogenita pro člověka nebyla stanovena.

Původcem tularemie je intracelulární parazit. Jeho virulence je dána kapslí, která inhibuje fagocytózu; neuraminidázou, která podporuje adhezi; endotoxinem; alergenními vlastnostmi buněčné stěny, stejně jako schopností reprodukce ve fagocytech a potlačování jejich zabíjecího účinku. Mechanismy virulence dosud nebyly dešifrovány. Kromě toho byly u tularemiového bacilu nalezeny receptory schopné interagovat s Fc fragmenty imunoglobulinů IgG. V důsledku takové vazby je narušena aktivita komplementových systémů a makrofágů.

F. tularensis v S-formě (virulentní) má dva antigeny - O a Vi (kapsulární antigen). O-antigen je příbuzný antigenům brucely. Disociace S->SR->R vede ke ztrátě kapsule, virulence a imunogenicity. Druh F. tularensis se dělí do tří geografických ras (poddruhů):

• Holarktický (nízko patogenní pro domácí králíky, nefermentuje glycerol a nemá enzym citrulin ureidázu, který se nachází v zemích severní polokoule);
• Středoasijský (nízce patogenní pro králíky, má citrulin ureidázu a fermentuje glycerol);
• Nearktický (americký), patogennější pro králíky, fermentuje glycerol, má citrulin ureidázu.

Kromě toho mají kmeny amerického a středoasijského poddruhu fosfatázovou aktivitu, která u kmenů holarktického poddruhu chybí.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ]

Rezistence původce tularemie

F. tularensis je ve vnějším prostředí poměrně stabilní, zejména pokud je obsažen v patologickém materiálu. V píci, obilí, kontaminovaném exkrementy nemocných hlodavců přežívá až 4 měsíce; ve vodě až 3 měsíce; v ledu více než 1 měsíc. Je citlivý na přímé sluneční záření (hyne do 30 minut), vysokou teplotu (při 60 °C hyne do 10 minut), pod vlivem 3% roztoku lysolu, 50% lihu, formalinu a dalších antiseptik hyne do 5-10 minut.

Epidemiologie tularemie

Hlavním rezervoárem tularemie v přírodě jsou hlodavci, mezi nimiž se v přirozených podmínkách vyskytují epizootie. Lidé se nakazí pouze od zvířat; patogen se nepřenáší z člověka na člověka. Patogen byl nalezen u 82 druhů hlodavců a zajícovitých, nejčastěji se vyskytuje u zástupců 4 čeledí: myšovití hlodavci (Muridae), zajíci (Leporidae), veverky (Sciuridae) a tarbíci (Dipodidae). V Rusku jsou hlavními přenašeči myšovití hlodavci: vodní krysy, hraboši obecní, myši domácí a ondatry ondatry.

Podle citlivosti na tularémii lze zvířata rozdělit do čtyř skupin:

• Skupina 1 - nejcitlivější (hraboši, vodní krysy, myši domácí, bílé myši, morčata a některé další). Minimální smrtelná dávka je jedna mikrobiální buňka;
• 2. skupina - méně citlivé (šedé krysy, syslové atd.). Minimální smrtelná dávka je 1 miliarda mikrobiálních buněk, nicméně jedna mikrobiální buňka stačí k infikování některých z nich;
• 3. skupina (predátoři - kočky, lišky, fretky). Odolní vůči vysokým infekčním dávkám, onemocnění probíhá bez viditelných projevů;
• Skupina 4 - imunní vůči tularémii (kopytníci, studenokrevní zvířata, ptáci).

Pro člověka je minimální infekční dávkou jedna mikrobiální buňka. Člověk se může nakazit všemi možnými způsoby: přímým a nepřímým kontaktem s nemocnými hlodavci, jejich mrtvolami nebo předměty infikovanými hlodavci; alimentárním způsobem (konzumací potravy a vody infikované hlodavci), vzduchem přenášeným prachem a přenosem. Infekce bakteriemi tularemie byla prokázána u 77 druhů krevsajících členovců. Zvláštní význam mají klíšťata rodu Ixodidae, u kterých patogen přetrvává po celý život a dokonce se transovariálně přenáší na potomstvo. Tyto okolnosti přispívají k ustavení onemocnění v přírodě. Člověk se nakazí klíšťaty nikoli kousnutím, ale v důsledku toho, že se patogen dostane na kůži spolu s exkrementy klíštěte.

V Rusku existuje 7 hlavních krajinných typů přírodních ohnisek tularemie: bažina, louka a pole, step, les, podhorský potok, tundra a tugai (poušť).

[ 7 ], [ 8 ], [ 9 ], [ 10 ]

Příznaky tularemie

Původce tularemie proniká do těla přes vnější obaly (poškozenou i neporušenou kůži a sliznice). V místě průniku se často tvoří vředy. Lymfatickými cévami se bakterie dostávají do regionální lymfatické uzliny a volně se v ní množí; zánětlivý proces vede ke vzniku bubonu. Odtud patogen proniká do krve, bakteriemie způsobuje generalizaci procesu, do kterého jsou zapojeny různé orgány a tkáně, jejichž proliferace bakterií vede k tvorbě granulomů a nekrotických vředů. S bakteriemií a generalizací je spojena alergická restrukturalizace organismu. Inkubační doba tularemie se pohybuje od 2 do 8 dnů. Onemocnění začíná akutně: objevuje se horečka, bolest hlavy, bolesti svalů, hyperémie obličeje. Další průběh závisí na místě vstupní brány, podle kterého se rozlišují následující klinické formy tularemie: ulcerózní-glandulární (bubonická), oční-glandulární, anginózní-glandulární, břišní a plicní. Úmrtnost u tularemie nepřesahuje 1-2 %.

Postinfekční imunita je silná, perzistentní, ve většině případů celoživotní, má buněčnou povahu, je způsobena převážně T-lymfocyty a makrofágy, v menší míře - protilátkami. Fagocytóza u jedinců s imunitou je úplná.

Laboratorní diagnostika tularemie

K diagnostice tularemie se používají všechny mikrobiologické metody. Studie se provádí v zabezpečených laboratořích. Materiál pro studii – krev, punkce bubonu, seškrab z vředu, výtok z spojivky, plak z hltanu, sputum atd. – je určen klinickou formou onemocnění. Kromě toho lze pro studii odebrat vodu a potraviny. V přirozených ohništích tularemie se provádějí plánované systematické studie k izolaci původce tularemie z hlodavců.

Bakteriologická metoda diagnostiky tularemie u lidí dává jen zřídka pozitivní výsledky. Čistá kultura se obvykle izoluje po jejím nahromadění na vnímavých laboratorních zvířatech. Pro biologické testy se používají bílé myši a morčata. Myši se infikují subkutánně, morčata intraperitoneálně; zvířata uhynou 3.–6. den, někdy po jinovatce. Infikovaná zvířata se chovají ve speciálních podmínkách (jako při diagnostice moru) a pozorují se 6–14 dní. Pokusná zvířata neuhynou 7–15 dní, 15.–20. den se porážejí a mrtvoly se pitvají. V přítomnosti tularemie se detekují patologické a anatomické změny ve formě produktivního procesu s nekrózou. Čistá kultura se izoluje z vnitřních orgánů na žloutkovém médiu, glukózo-cysteinovém krevním ložisku atd. Identifikace je založena na morfologii a tinkturálních vlastnostech patogenu, absenci růstu na MPA a aglutinaci s homologním sérem. patogenita pro bílé myši a morčata. Čistou kulturu lze izolovat infekcí 12denních kuřecích embryí a žloutkového váčku. Pro izolaci čisté kultury patogena z vody se voda centrifuguje nebo filtruje přes bakteriální filtry a sediment se používá k infikování laboratorních zvířat. Při studiu potravinářských výrobků se promyjí MP B, centrifugují a sediment se používá k infikování laboratorních zvířat.

Současně s bakteriologickým vyšetřením se z zkoumaného materiálu připravují nátěry-otisky, které se barví podle Romanovského-Giemsy. V nátěrech z orgánů lze detekovat malé kokovité a tyčinkovité bakterie, které se nacházejí intracelulárně a ve formě shluků a tvoří jemnou kapsli.

Pro diagnostiku se používá podrobná aglutinační reakce, RPGA a RIF.

Pro včasnou diagnostiku tularemie (od 5. dne po začátku onemocnění) se používají alergické testy. Používají se dva typy tularinu a podle toho se používají dva způsoby jejich podání: kožní a intradermální. Vzhledem k tomu, že koncentrace alergenu v obou typech tularinu je odlišná, je nepřijatelné používat kožní tularin pro intradermální test a naopak. Výsledky alergické reakce se berou v úvahu dynamicky po 24, 36, 48 hodinách. Za pozitivní výsledek se považuje infiltrát o průměru alespoň 5 mm. U očkovaných osob nebo osob, které prodělaly tularemie, zůstávají alergické testy pozitivní po dobu několika let (anamnestická reakce).

Specifická prevence tularemie

Pro specifickou prevenci se používá vakcína proti tularémii, kterou v roce 1930 získali ruští vojenští lékaři B. Ya. Elbert a N. A. Gaisky z kmene Me 15. Vakcína poskytuje silnou imunitu po dobu 5-6 let při infekci evropským a holarktickým poddruhem a je účinná proti americké variantě patogenu. Očkování se provádí podle epidemiologických indikací a také u osob patřících do rizikových skupin. Současné očkování proti tularémii a brucelóze, tularémii a moru, jakož i proti tularémii a některým dalším infekcím je povoleno.

Nespecifická prevence tularemie je stejná jako u jiných zoonóz a je zaměřena především na hubení hlodavců.