Dermální ekvivalent. Historie a výsledky klinických studií

V pozdních osmdesátých letech byla na Stanfordské univerzitě vyvinuta tekutá forma bovinního kolagenu, která se při tělesné teplotě přeměnila na měkký elastický substrát. Droga byla registrována a schválena pro použití v několika evropských zemích jako implantabilní lék zvaný Zyderm Collagen Implantant. Tato droga byla první implantát. Později se objevily další činidla pro obrysovou plastiku, jako je restylan, perlen, farmakrylový gel, artekol, biopolymerový gel a další. Tyto léky se začaly používat nejen k modelování obrysů a ke korekci věku souvisejících změn v kůži, ale také k léčbě nebo spíše k vyrovnání úlevy jizev. Všichni byli vstříknutí do dna břicha.

Hledání nových způsobů léčby hypotrofických jizev nás vedla k myšlence využití k tomuto účelu uměle vytvořený kůže protějšek - „dermální ekvivalent“ (DE), který také použít tekuté kolagenu. Varianty umělých kožních náhrad bylo mnoho, ale představa, že z celkového počtu - vytvořit konstrukční prvky dermis podobně jako kožní tkáně, které by neměly být odmítnuty v případě transplantací a měl dobrý substrát pro klíčení vlastních komponent dermis a epidermis. Je známo, že základní stavební prvky dermis jsou buněčné, vláknité prvky a intersticiální substance. Vláknité prvky jsou většinou kolagenu a elastinu vlákna, intersticiální látka - glykoproteiny, proteoglykany a glykosaminoglykany. Hlavní funkční prvek dermis buňky - fibroblastů, fibroblastů buněčná populace, která je zdrojem v podstatě všechny z konstrukčních prvků dermis. Proto při vytváření „náhradu kůže“ většina vědců použít kolagen substrát, smíšený s fibroblasty a glykosaminoglykany. Výše v té či oné formě vrstvy keratinocytů se používá k vytvoření polnosloynoy kůže a rychlejší obnovení životaschopnost transplantovaného ekvivalentu kůže, což usnadňuje četnými keratinocyty vylučovanými růstové faktory. Jeden z prvních variant "živého ekvivalentu kůže" navrhl v roce 1983 E.Bell a spoluautoři. Kožní fibroblasty byly smíchány s kolagenu, plazmy a růstových médií, což vede k tvorbě gelu, na jehož povrchu se pěstuje keratinocyty. Všechny kultivované po dobu 1 -2 týdnů vilro, načež dermální ekvivalent uvažovaného zralé a reprezentované ve formě životaschopných tkáně průsvitné elastické hmoty. Autoři navrhli přenést celou vrstvu struktury pokožky na povrchy rany pacientů s popáleninami. Jako základ pro dermální ekvivalent, někteří autoři používají kolagenovou houbou nebo kolagenové matrice, se vztahuje proteoglykany a naplněn fibroblasty, které se pěstují na vrcholu které autologních keratinocytů. V důsledku toho byl vytvořen takzvaný trojrozměrný model kůže. Pro kultivaci keratinocytů pro následný přenos do povrchu rány, někteří autoři se také používají jako umělém substrátu matrice kolagenu a glykosaminoglykanů chitosanu mrtvoly kůže, vepřové kůže. 7-14 dní po zahájení kultivace, polnosloyny štěpu obsahující dermis a epidermis, byly transplantovány do rány pacientů nebo zvířat.

Umělá náhrada kůže byla použita nejen k obnovení pokožky spáleného, ale i k testování léků na cytotoxicitu, ke studiu růstových faktorů in vitro.

Nedostatečná podle našeho hlediska provozní efektivita dermabrasion hlubokých hypotrofických jizev v kombinaci s přenosem IPC dal příležitost pokusit sladit topografii pokožky zaočkováním vybrání hypotrofických jizva analogového dermální ekvivalent. Substrátem pro vytvoření dermálního ekvivalentu byl kapalný kolagen, získaný laboratorním způsobem, kde byla zavedena suspenze fibroblastů. Dermální ekvivalent, stejně jako IPC, vytvořený specializované laboratoře certifikované pro tuto činnost a v den a hodinu provozu se dodává ve skleněné lahvičce v nádobě s ledem na kliniku.

Provozní brusné jizvy prováděné obvyklým způsobem po antiseptické ošetření pokožky, a lokální anestezii 2% lidokain nebo novocaine nebo artikainu. Mletím byl povrch bachoru vyrovnán a současně byly vytvořeny podmínky pro štěpení kultivovaných buněk nebo buněčných kompozic. Po tom, kapalina kolagen gel zchlazené naočkovány fibroblasty se aplikuje sterilní špachtlí na leštěném povrchu hypotrofických jizev (jizvy ve vybrání), kde je pod vlivem polymerační teploty těla.

Výsledkem je, že po 5 až 10 minutách z kolagenu s kapalným stavem fibroblasty polymeruje do tlustého gelového stavu. Po zesílení DE byla nahoře aplikována bandáž se suspenzí nebo IPC na substrátu.

Vícevrstvý sterilní obvaz byl fixován jako při transplantaci IPC. V závislosti na povrchu jizev, obalu rány, na kterém byly umístěny keratinocyty a typu mletí, byl obvaz roztrhaný během 7 až 12 dnů.

Způsoby kombinace léčebných hypotrofických jizev základě provozních dermabrasion, následovaný převodem do vybrání bachoru „dermální ekvivalent“ a keratinocyty v vícevrstvého zásobníku pěstovaných na speciálních vinutých krytin, nebo jako suspenze, může podstatně lépe kosmeticky přijatelné výsledky s poklesem nebo úplného vymizení (dosažení -). Dermální ekvivalent tvoří vlastní tkáň (dermis), tkáň jizvy zůstává pod nově vytvořenou tkání. IPC vytváří normální tloušťku a funkční aktivitu epidermis, díky čemuž má celkový vzhled jizvy během několika měsíců tendenci k výraznému zlepšení.

Taková taktika léčby hypotrofních jizev v současné době může být nazývána optimálním řešením tohoto problému. Ovšem verze DE, kterou používáme ve formě kolagenového gelu s fibroblasty inokulovanými do něj, není v práci příliš vhodná. DE pro práci s hypotrofickými jizvy by měla být zpočátku silnější, aby mohla být umístěna do prohlubování jizev, rozložit ji. Po kterém byla horní rána navinutá keratinocyty. Tudíž lze říci, že tento směr v práci s hypotrofními jizvy je plánován pouze, ale prognózy pro jeho další vývoj a studium jsou velmi optimistické.

Složitost a vysoké náklady na získání vícevrstvých vrstev keratinocytů jako terapeutického materiálu stimulovaly potřebu hledání dalších variant buněčných kompozic. Velký zájem je výzkumníci kultivace fibroblastů, které při přesazování na povrchu rány mají za následek, v mnoha ohledech podobné výsledky transplantace keratinocytů, ale je mnohem více jednoduchý a levný buněčný materiál. V našich studiích jsme provedli několik pacientů s hypotrofními jizvy mezoterapií pomocí suspenze fibroblastů pro jizvení.

Suspenze fibroblastů v růstovém médiu s 1,5 až 2 miliony buněk na ml. Byla pod jizvy podávána mezoterapeutickými technikami (mikropapulmonární, infiltrační). Počet ošetřovacích sedmiček od 4 do 10, v závislosti na omezení doby bachoru, věku pacienta a hloubce vady. Interval mezi relacemi je 7-10 dní. Zpravidla bylo zavedení suspenze autologních a alogenních fibroblastů doprovázeno mírnou, rychlou tekoucí vaskulární reakcí.

Výsledkem je, že klinické studie ukázaly, že pod vlivem transplantovaného IPC snižuje trvání zánětlivé odpovědi v kůži a jizvy po dermabrasion provozní a urychlení epitelizace ranných ploch na průměru 3-4 dny.

Při práci s normotrofickými a hypertrofickými jizvy je největší důležitost zrychlení hojení pooperačních eroze, neboť v tom spočívá možnost získání optimálního terapeutického účinku.

Transplantace kožního ekvivalentu vedla k vyplnění (-) tkáně hypotrofních jizev, vyhlazení jejich reliéfu a vyhlazení okolní kůže, což způsobilo, že oblast jizev je mnohem menší.

Zavedení suspenze fibroblastů do hypotrofních jizev také vedlo k vyrovnání reliéfu kůže a snížení plochy jizev.

Ve všech případech transplantace buněčného materiálu byl zaznamenán účinek aftereffectu, kdy se po několik měsíců objevilo zlepšení estetického vzhledu jizev, které se stávalo jako dermoidní struktura.

Všechny účinky, které pozorujeme, souvisejí s realizací biostimulačního potenciálu transplantovaných buněk. Není ani nejmenší roli, zdá se nám, že počet buněčných vrstev v transplantacích je obvykle o 10-30% vyšší. Celkový mobilní potenciál na jednotku plochy je tedy již o 10-30% vyšší než normální. Navíc nejlepší výsledky při transplantaci keratinocytů a fibroblastů byly získány transplantací buněčného materiálu od mladých zdravých lidí. Tato skutečnost mimochodem hovoří ve prospěch využití alogenní kultury získané od mladých a zdravých dárců. Bioenergetický a informační potenciál takové kultury se přenáší do svých buněk, někdy docela starších příjemců, díky nimž se zlepšuje "kvalita" vlastních tkání a buněk.

Aplikace kultury keratinocytů a fibroblastů tak umožňuje:

• Zrychlete epitelizaci jizev po dermabraze.
• Zmenšete vzhled jizev, a to nejen kvůli vyrovnání jejich povrchu s povrchem okolní pokožky, ale také kvůli vytvoření celé epidermis nad nimi.
• Zlepšit výsledky operační dermabraze způsobené účinkem cytokinů transplantovaných buněk na jizvu, která má nakonec tendenci se přeměnit na dermálně podobnou strukturu.
• Získat esteticky mnohem přijatelnější výsledky léčby pacientů s normotrofickými, hypotrofickými, hypertrofickými, atrofickými jizvami a strijami.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]